植物遗传资源是人类赖以生存和发展的重要物质基础，保持其遗传多样性是人类实现可持续发展的重要保证。柿，资源丰富，为创制其新种质提供了广泛的背景材料。可是，传统的田间种植保存，易受病虫害、自然灾害及经费短缺等弊端的困扰，使得大量的柿资源面临或已经流失。离体保存经济、安全和实用，正在成为田间种植保存的重要补充技术。鉴于此，我们进行了柿种质资源离体保存及其遗传稳定性研究。主要结果如下： 1．建立了柿35份试材的离体培养体系：茎尖在含ZT 2.0mg／L或CPPU 0.2mg／L和0～0.05mg／L的IAA或IBA的MS（1／2N）+PVP 600mg／L+蔗糖30g／L+琼脂7mg／L培养基上培养，繁殖系数高。本体系用CPPU代替ZT，大大降低成本。 2．优化了柿试管苗生根条件：试管苗嫩梢经IBA 250mg／L浸基部15s后转接到1／2MS（1／2N）+活性炭1000mg／L的生根培养基中或直接接种到添加有IBA 1mg／L的上述生根培养基中诱导生根，生根率高，根条数多。 3．建立了柿7个基因型试管苗单芽姊妹系，为保存后再生植株的遗传稳定性检测提供了材料。 4．采用常温继代培养对柿试管苗保存了4～5年，并对保存后的5种基因型进行了遗传稳定性检测。结果核DNA含量、染色体数没有改变；RAPD分析，次郎3648条扩增带和罗田甜柿4752条扩增带中均没有出现变异带；前川次郎变异率为0.028％；松本早生变异率为0.031％；君迁子变异率为0.064％；磨盘柿变异率为0.016％。这说明常温继代保存柿试管苗易引起DNA水平上的变异。 5．建立起柿试管苗缓慢生长法保存体系：试管苗在添加有甘露醇20g／L或PP₃₃₃ 1.0mg／L的MS（1／2N）+蔗糖 20g／L+琼脂7g／L+PVP 500mg／L培养基上或在含有CPPU 0.2mg／L的1／2MS（1／2N）+蔗糖 15g／L+琼脂7g／L+PVP 500mg／L培养基上于6±1℃和800lx下保存18个月时，90％以上仍存活；分别对上述3种方法保存的再生植株遗传稳定性检测，核DNA含量和染色体数没有发现改变；RAPD分析，PP₃₃₃保存的次郎变异率为0.16％，君迁子变异率为0.86％；另2种方法保存的再生植株中没有发现变异带。 6．对柿休眠芽茎尖进行了两步冷冻法超低温保存：腋芽枝段依次经过0，-5，-10和-20℃各12h后投入液氮保存，40℃水浴化冻后切取腋芽，灭菌后剥取茎尖接种于MS（1／2N）培养基上培养，再生率超过60％。对柿休眠芽茎尖进行了玻璃化法超低温保存研究:茎尖在含有蔗糖0.3、0.5和0.7 moFL的培养基上预培养各ld，20℃下装载液过渡20面n，0℃下玻璃化液少V凡或Pv凡)处理30⁴0^后液氮保存，化冻、洗涤后在M以l瓜N)培养基上培养，再生率超过70%。分别对柿休眠芽茎尖两步冷冻法和玻璃化法超低温保存的5种和6种基因型的再生植株进行了遗传稳定性检测:细胞染色体数没有发生改变:月几P分析，不同基因型的756¹026条带中，也没有发现变异带。这说明柿休眠芽茎尖超低温保存可能没有发生遗传变异。9.建立起柿试管苗茎尖玻璃化法超低温保存体系:试管苗在加有蔗糖0.3 mol几培养基上于 6土1℃下锻炼6周后，切取茎尖在含蔗糖0.7 mol几的培养基上预培养2d，20℃下装载液 过渡2伪正n，o℃下PVS:处理80面n后液氮保存，化冻、洗涤后恢复培养，再生率超过 3识/o。君迁子、次郎、罗田甜柿和罗田甜柿加倍体的再生单芽姊妹系的细胞学检测，核DNA 含里和染色体数没有发生改变;次郎和罗田甜柿各10个单芽姊妹系川几P分析，在分别 扩增出的11 020条和10670条谱带中，均没有发现变异带。这为柿试管苗茎尖玻璃化法超 低温保存提供了可行性依据。10.对柿品种禅寺丸花粉进行了干燥脱水法和玻璃化法超低温保存研究，结果表明:0℃下硅 胶干燥肠或20士l℃下PVSZ处理40一60min后直接投入液氮保存，高温40℃解冻后，相 对存活率（TTC检测）和萌发率均在90%以上，且花粉活力与保存时间长短无关。这为 柿花粉长期保存提供了有效途径。