论文部分内容阅读
背景和目的凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)是一种重要的凝血因子,可促进纤维蛋白单体交联形成稳定的纤维蛋白凝块。FⅩⅢ本质是一种谷氨酰胺转移酶,除纤维蛋白外,其底物可多达140余种,因此参与到多种生理和病理过程中。FⅩⅢ由A亚单位二聚体(FⅩⅢ-A2)和B亚单位二聚体(FⅩⅢ-B2)结合而成,其中FⅩⅢ-A2在骨髓细胞中合成,主要存在于单核/巨噬细胞和巨核细胞中,FⅩⅢ-B2由肝细胞合成。研究发现,急性髓系白血病粒-单核细胞型(AML-M4)和单核细胞型(AML-M5)患者肿瘤细胞内FⅩⅢ-A2含量升高。随后发现急性早幼粒细胞白血病(APL)患者肿瘤细胞内FⅩⅢ-A2含量也升高。正常淋巴细胞内不表达FⅩⅢ-A2,但在部分急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的肿瘤细胞内FⅩⅢ-A2的含量升高。本研究拟探讨急性白血病患者外周血FⅩⅢ浓度和活性的变化,以及该变化是否与骨髓或外周血肿瘤细胞内FⅩⅢ-A2的合成有关。此外,FⅩⅢ作为一种重要的凝血因子,目前仍无标准的活性测定方法,本研究拟建立FⅩⅢ活性测定方法,并分析急性白血病患者体内FⅩⅢ活性和浓度的变化与患者临床出血表现的相关性,同时测定血友病患者FⅩⅢ的浓度和活性,观察该类出血性疾病患者体内FⅩⅢ的变化。方法收集2016年11月至2017年5月于北京协和医院住院的初治急性白血病患者外周血和骨髓标本,统计患者的临床资料。分离外周血血浆,并提取外周血和骨髓单个核细胞的RNA。分别利用ELISA方法和凝血仪测定外周血血浆FⅩⅢ浓度和活性,利用实时定量PCR(qRT-PCR)方法测定单个核细胞内FⅩⅢmRNA的含量。分析患者经过治疗后外周血FⅩⅢ浓度和活性的变化,以及外周血和骨髓单个核细胞内mRNA表达量的变化。根据测定的外周血FⅩⅢ浓度和活性,分析其与急性白血病患者临床出血表现的相关性。利用ELISA方法和凝血仪测定血友病患者外周血FⅩⅢ浓度和活性的,分析血友病患者FⅩⅢ的变化。结果研究共纳入31例初治的急性白血病患者,其中AML24例,ALL7例。AML和ALL患者经过治疗后外周血FⅩⅢ浓度和活性的变化相反。AML和ALL患者治疗前外周血FⅩⅢ浓度分别为24.09(20.91)μg/mL和32.08±10.60μg/mL,治疗后FⅩⅢ浓度分别降低为18.43±4.74μg/mL和19.21±8.69μg/mL。AML患者治疗前外周血FⅩⅢ活性为72.75±28.98%,治疗后升高为94.74± 17.72%。ALL患者外周血FⅩⅢ活性在治疗后也有明显升高趋势。AML和ALL患者治疗前外周血和骨髓单个核细胞内FⅩⅢ-AmRNA的含量与相应对照组无明显差异。AML患者治疗前外周血单个核细胞内,FⅩⅢ A亚单位(FⅩⅢ-A)外显子 3 和外显子 14-15 的 △ Ct 值(△ Ct exon3 和 △ Ct exon14-15)分别为 0.93±2.36,1.53±2.21,骨髓相应的 △Ctexon3 和 △Ctexon14-15 分别为 2.21±2.45,1.70±2.40;均与相应对照组无明显差异。ALL患者治疗前外周血单个核细胞内 FⅩⅢ-A A Ct exon3 和 △ Ct exon14-15 分别为 1.49±1.43 和 1.66±1.48,骨髓相应的 △Ctexon3 和 △Ctexon14-15 分别为 1.30±1.58,1.85±2.94;均与相应对照组无明显差异。急性白血病患者外周血FⅩⅢ活性与患者临床出血表现无明显相关性。临床表现为关节出血的血友病A患者外周血FⅩⅢ浓度(10.74±3.15μg/mL)低于正常对照(16.55±3.29μg/mL),患者FⅩⅢ活性(80.63±20.52%)也低于正常对照(103.49±13.06%)。结论AML和ALL患者治疗后FⅩⅢ浓度低于治疗前,但FⅩⅢ活性高于治疗前,经过治疗后外周血FⅩⅢ浓度和活性的变化相反。急性白血病患者治疗前外周血和骨髓单个核细胞内FⅩⅢ-AmRNA的含量与对照组无明显差异,推测外周血中升高的FⅩⅢ浓度与急性白血病肿瘤细胞无明显相关,其来源尚需进一步的探究。急性白血病患者临床出血表现与外周血FⅩⅢ的活性降低无明显相关性。临床表现为关节出血的血友病A患者除FⅧ缺乏外,可能也存在外周血FⅩⅢ浓度和活性的相对降低。