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目的:通过观察寿胎丸对控制性超促排卵小鼠围着床期子宫内膜厚度及MVD、TGF-β1表达的影响,从而探究寿胎丸改善子宫内膜容受性的机制,为其在辅助生殖技术中的应用与发展提供初步理论依据。
方法:选择SPF级ICR系健康雌性未孕小鼠240只,适应性喂养7天后对其进行阴道涂片,连续观察两个动情周期,选择动情周期正常的200只小鼠为研究对象。随机分为5组,每组30只,分别为空白组、模型组、寿胎丸低、中、高剂量组。除空白组外,余各组建立控制性超促排卵小鼠模型(亮丙瑞林+hMG+hCG)。寿胎丸低、中、高剂量组分别从造模第1天开始用不同浓度寿胎丸中药汤剂灌胃;模型组和空白组给予同等剂量生理盐水灌胃,连续11天。空白组于动情期,模型组、寿胎丸低、中、高剂量组于注射hCG日,按雌雄2:1比例合笼。次日晨见阴栓记为妊娠第1天(D1),各组孕鼠分别于孕第2、4、6天取材,采用HE染色法观察小鼠子宫内膜厚度变化;免疫组化法检测各组小鼠子宫内膜MVD、TGF-β1表达的情况。
结果:(1)经HE染色显微镜观察后发现,小鼠子宫内膜的厚度随着妊娠天数的增加而升高。①与空白组比较,模型组小鼠在孕2、4、6天中,子宫内膜发育不良,厚度减低,差异具有统计学意义(P<0.05);②与模型组相比,寿胎丸三个剂量组孕2、4、6天子宫内膜均增厚,差异有统计学意义(均P<0.05);③与寿胎丸低剂量比较,中、高剂量组孕2、4、6天子宫内膜虽然逐渐增厚但无明显统计学意义(P>0.05),中剂量与高剂量组相比,子宫内膜增长程度无明显统计学意义(P>0.05)。(2)免疫组化法检测小鼠子宫内膜微血管密度(MVD):①与空白组比较,模型组小鼠在孕2、4、6天中子宫内膜内微血管密度增加少于空白组,差异具有统计学意义(P<0.05);②与模型组相比,寿胎丸三个浓度组孕2、4、6天子宫内膜微血管生成增加,差异有统计学意义(均P<0.05);③中药寿胎丸组内,与低剂量比较,中、高剂量组孕2、4、6天子宫内膜微血管密度增加,有统计学意义(P<0.05),中剂量与高剂量组相比,微血管密度无明显统计学意义,(P>0.05)。(3)免疫组化法检测小鼠子宫内膜表皮生长因子(TGF-β1):①与空白组比较,模型组小鼠在孕2、4、6天中,子宫内膜TGF-β1阳性表现较差,差异具有统计学意义(P<0.05);②与模型组相比,寿胎丸三个剂量组孕2、4、6天子宫内膜TGF-β1阳性表现增加,差异有统计学意义(均P<0.05);③中药寿胎丸组,与低剂量比较,中、高剂量组孕2、4、6天子宫内膜TGF-β1阳性率增加,有统计学意义(P<0.05),中剂量与高剂量组相比,TGF-β1虽在增加但无明显统计学意义(P>0.05)。
结论:(1)COH影响围着床期子宫内膜的增殖,使内膜厚度相比正常厚度减少;同时TGF-β1、MVD在子宫内膜的表达降低,提示子宫内膜容受性变差。
(2)中药寿胎丸可以上调TGF-β1、MVD在子宫内膜的表达,改善子宫内膜容受性,中、高剂量效果优于低剂量。
方法:选择SPF级ICR系健康雌性未孕小鼠240只,适应性喂养7天后对其进行阴道涂片,连续观察两个动情周期,选择动情周期正常的200只小鼠为研究对象。随机分为5组,每组30只,分别为空白组、模型组、寿胎丸低、中、高剂量组。除空白组外,余各组建立控制性超促排卵小鼠模型(亮丙瑞林+hMG+hCG)。寿胎丸低、中、高剂量组分别从造模第1天开始用不同浓度寿胎丸中药汤剂灌胃;模型组和空白组给予同等剂量生理盐水灌胃,连续11天。空白组于动情期,模型组、寿胎丸低、中、高剂量组于注射hCG日,按雌雄2:1比例合笼。次日晨见阴栓记为妊娠第1天(D1),各组孕鼠分别于孕第2、4、6天取材,采用HE染色法观察小鼠子宫内膜厚度变化;免疫组化法检测各组小鼠子宫内膜MVD、TGF-β1表达的情况。
结果:(1)经HE染色显微镜观察后发现,小鼠子宫内膜的厚度随着妊娠天数的增加而升高。①与空白组比较,模型组小鼠在孕2、4、6天中,子宫内膜发育不良,厚度减低,差异具有统计学意义(P<0.05);②与模型组相比,寿胎丸三个剂量组孕2、4、6天子宫内膜均增厚,差异有统计学意义(均P<0.05);③与寿胎丸低剂量比较,中、高剂量组孕2、4、6天子宫内膜虽然逐渐增厚但无明显统计学意义(P>0.05),中剂量与高剂量组相比,子宫内膜增长程度无明显统计学意义(P>0.05)。(2)免疫组化法检测小鼠子宫内膜微血管密度(MVD):①与空白组比较,模型组小鼠在孕2、4、6天中子宫内膜内微血管密度增加少于空白组,差异具有统计学意义(P<0.05);②与模型组相比,寿胎丸三个浓度组孕2、4、6天子宫内膜微血管生成增加,差异有统计学意义(均P<0.05);③中药寿胎丸组内,与低剂量比较,中、高剂量组孕2、4、6天子宫内膜微血管密度增加,有统计学意义(P<0.05),中剂量与高剂量组相比,微血管密度无明显统计学意义,(P>0.05)。(3)免疫组化法检测小鼠子宫内膜表皮生长因子(TGF-β1):①与空白组比较,模型组小鼠在孕2、4、6天中,子宫内膜TGF-β1阳性表现较差,差异具有统计学意义(P<0.05);②与模型组相比,寿胎丸三个剂量组孕2、4、6天子宫内膜TGF-β1阳性表现增加,差异有统计学意义(均P<0.05);③中药寿胎丸组,与低剂量比较,中、高剂量组孕2、4、6天子宫内膜TGF-β1阳性率增加,有统计学意义(P<0.05),中剂量与高剂量组相比,TGF-β1虽在增加但无明显统计学意义(P>0.05)。
结论:(1)COH影响围着床期子宫内膜的增殖,使内膜厚度相比正常厚度减少;同时TGF-β1、MVD在子宫内膜的表达降低,提示子宫内膜容受性变差。
(2)中药寿胎丸可以上调TGF-β1、MVD在子宫内膜的表达,改善子宫内膜容受性,中、高剂量效果优于低剂量。