目的探求17β-E2单用或联合顺铂应用于卵巢癌裸鼠移植瘤后,瘤体的生长情况及与血管形成、细胞凋亡的关系。方法(1)细胞培养:从液氮罐中取出卵巢癌细胞株HO-8910,应用传统方法复苏,接种于含10%的去雌激素的胎牛血清的RPMI-1640培养液中,于细胞培养箱中培养。要求培养箱设定条件为37℃、5%二氧化碳饱和湿度。严密观察卵巢癌细胞生长情况,一般约3天左右,细胞长到对数生长期时消化传代。(2)接种裸鼠:30只雌性BALB/c裸鼠,4周龄,体重为14-16克,适应性生长于泰山医学院SPF级实验动物中心,用酶消化处于对数生长期的单层癌细胞,配制成浓度为1×107/ml的单细胞悬液,每只裸鼠用1ml空针在其背侧近后肢处皮下注射0.2ml。(3)体内裸鼠移植瘤实验:细胞接种后瘤子长至粟粒大小时,用剪耳标记法将裸鼠随机分成不同用药的6组,每组裸鼠5只。药物浓度及具体分组如下:A组(对照组):0.2ml生理盐水;B组(低剂量17β-E2):0.2ml剂量为1.3μg/d 17β-E2;C组(高剂量17β-E2):0.2ml剂量为3.9μg/d 17β-E2;D组(顺铂组):0.2ml浓度为5mg/kg的顺铂;E组(顺铂+低剂量17β-E2):0.2ml顺铂5mg/kg +1.3μg/d 17β-E2;F组(顺铂+高剂量17β-E2):0.2ml浓度为5mg/kg的顺铂+3.9μg/d 17β-E2。(4)肿瘤生长监测:在严格无菌下每周两次用精确的游标卡尺测量移植瘤a、b并记录,a、b分别表示瘤体的最长径与最短径,根据体积变化绘制移植瘤生长曲线图并计算抑瘤率。(5)病理组织学检查:脱臼法处死裸鼠,完整取出瘤体,观察瘤体大体观并称重,用多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,切片,HE染色后观察组织学变化。(6)流式细胞术检测移植瘤组织的细胞凋亡、细胞周期情况。(7)免疫组化SP法检测各用药组裸鼠皮下抑制瘤中VEGF、CD34的表达水平。结果(1)对照组肿瘤体积大于其它用药组,A组、B组、C组、D组、E组、F组抑瘤率分别为0.00、25.91%、28.99%、38.84%、55.95%、67.71%,差异有统计学意义(P<0.05)。17β-E2加上顺铂两者减缓肿瘤生长的效果明显强于单独用药组(P<0.05,差异有统计学意义),而且高剂量的17β-E2组减缓肿瘤生长的效果更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)各用药组应用后裸鼠体重的变化:用药后A组、B组、C组、D组、E组、F组的裸鼠体重均有增加(P>0.05,差异无统计学意义),而C组即顺铂组的裸鼠用药后,体重明显降低,并且出现明显饮食减少、活动缓慢、反应慢、皮肤没有光泽等表现,说明17β-E2与顺铂联合应用,使顺铂作用于肿瘤的效果明显提高,17β-E2应用后,顺铂作用于裸鼠后的消化道反应等毒副反应明显降低。(3)肿瘤组织病理观察:A组对照组肿瘤细胞成低分化状态,细胞呈密集实性,肿瘤细胞排列不规则,有明显的异型性,核浆比例明显增大,易见核分裂象。每个高倍镜视野下见3~4个核分裂象。B组、C组、D组、E组、F组癌细胞排列稍规则,细胞变小,核浆比例减少,核分裂象减少,每个高倍镜视野约有3~4个核分裂象。(4)凋亡情况:各用药组凋亡率较对照组凋亡率均升高,低剂量17β-E2组与对照组凋亡率相比,P>0.05,差异无统计学意义,说明对照组、低剂量17β-E2的凋亡率没有显著差别。C组、D组、E组、F组与A组比较,P<0.05,差异有统计学意义,各用药组细胞凋亡中以晚期凋亡居多。(5)细胞周期:各治疗组细胞周期G0/G1期细胞逐渐减少,S期细胞明显增多,说明药物可能将细胞主要阻滞于S期。(6)免疫组织化学法检测VEGF蛋白含量,CD34计数,对于每个指标免疫组织化学评分,各处理组和对照组相比,E组、F组和单用药组相比,P<0.05,差异均有统计学意义。结论(1) 17β-E2与顺铂单独及联合应用于裸鼠,能减缓人卵巢癌皮下移植瘤的生长,且高剂量17β-E2的作用更加明显。(2) 17β-E2与顺铂单独及联合应用减缓卵巢癌皮下移植瘤生长的作用,可能是通过阻滞细胞周期于S期,促进细胞凋亡有关。(3) 17β-E2作用于瘤体后VEGF阳性表达降低,可能是通过抑制肿瘤血管生成,从而减缓裸鼠移植瘤的生长。(4) 17β-E2能降低顺铂的细胞毒性作用,两药合用起协同作用。(5)上皮性卵巢癌患者术后应用雌激素,不仅不会增加卵巢癌的复发,提高其生活质量,而且提高了顺铂疗效。