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EB病毒与鼻咽癌的发生密切相关，该病毒以环状DNA的形式整合在宿主细胞染色体上。由于鼻咽位置较深，早期病变在临床常规体检中不容易被发现，且CT等影像学诊断很难区分早期鼻咽癌与其它鼻咽增生性病变。因此，创伤小、成本低、检测速度快的血清学诊断方法是目前鼻咽癌早期诊断研究的热点和难点。鉴于此我们拟通过表达鼻咽癌BZLF1-BMRF1融合基因的蛋白抗原来建立检测病人血清中EB病毒相关抗体，为鼻咽癌的早期诊断及广谱筛查提供技术手段。本研究根据本实验室pGEX5T-BZLF1-BMRF1质粒的测序结果，利用premer5.0设计引物，从已有EB病毒抗原基因序列的质粒上，通过PCR方法扩增获得目的基因片段，与载体pET32a连接，构建重组质粒pET32a/BZLF1-BMRF1，在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，经IPTG诱导，SDS-PAGE分析蛋白可溶性、Western blot检测所表达蛋白的免疫原性，并通过优化的硫酸铵沉淀、离子交换层析和亲和层析对重组蛋白进行纯化。辣根过氧化物酶标记纯化的Zta-P54融合蛋白，利用棋盘法确定重组抗原包被和酶标抗体工作浓度，初步建立新的鼻咽癌诊断及筛查ELISA方法，对其进行特异性、精密性和临床分析。结果表明：1）成功构建重组质粒pET32a/BZLF1-BMRF1实现了Zta-P54融合蛋白的可溶性表达；2）建立了该抗原的优化纯化程序，纯度可达96.5%；3）利用所表达蛋白初步建立了鼻咽癌ELISA间接检测方法与临床诊断结果符合率较高，有望用于鼻咽癌前期辅助诊断及大规模筛查，同时，为鼻咽癌特异性血清学诊断方法的建立提供了借鉴。