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目的：至今胰腺癌确切病因不明,可能与吸烟、饮酒、咖啡、高蛋白饮食、环境、职业、家族和遗传因素等相关。伴随着分子生物学的发展,纵观国内外研究关于胰腺癌发病机制的探讨很多,多数从分子基因水平进行,其发生发展与其他肿瘤一样可能涉及癌基因激活、抑癌基因失活和基因错配修复。表观遗传学成为近年研究的热点,特别是抑癌基因启动子的高甲基化与去乙酰化使抑癌基因表达沉默失去抑癌作用,成为胰腺恶性肿瘤发生及转移的一种机制,揭示了部分胰腺癌发生发展的原因,异常表观遗传学改变征像为早期血清学或是外分泌液检测和早期诊断治疗提供理论依据,同时拟寻找新的早期胰腺癌特异肿瘤标志物。本实验将探讨盐酸普鲁卡因(procaine, PCA)对人胰腺癌PANC-1细胞增殖的影响,分析药物处理前后肿瘤坏死因子受体超家族成员10C (TNFRSF10C) mRNA表达的变化,并探讨盐酸普鲁卡因抑制人胰腺癌PANC-1细胞增殖的分子机制,以期为胰腺癌的发病机制及治疗提供新的思路并找到新的理论依据。 方法：(1)体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,四甲基偶氮唑盐比色法观察24小时、48小时、72小时及96小时细胞生长及抑制情况；分别以5 mmol/L PCA处理24 h,10 mmol/L PCA处理24 h,10 mmol/L PCA处理48 h,观察细胞形态学改变；流式细胞仪检测细胞生长周期改变；构建体外甲基化DNA(IVD)和非甲基化(NL)的阳性对照,采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation- specific PCR,MSP)检测人胰腺癌PANC-1细胞中TNFRSF10C基因甲基化状况；逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)和蛋白印迹技术(Western Blotting)检测人胰腺癌PANC-1细胞内TNFRSF10C基因mRNA及蛋白表达情况。(2)用PCA和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)单独及联合处理PANC-1细胞,观察细胞的增殖变化,检测TNFRSF10C mRNA在用药前后表达有否改变,用甲基化特异性PCR法(Msp法)检测胰腺癌PANC-1细胞TNFRSF10C基因启动子甲基化状态。 结果：(1)倒置显微镜观察发现被PCA处理后的人胰腺癌PANC-1细胞呈现体积缩小、融为空泡、并且漂浮于培养基中等增殖抑制及死亡的形态学特征；四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)结果分析表明PCA能显著抑制PANC-1细胞分裂增殖,其抑制率随着药物浓度的升高而增强；随着时间的延长抑制率亦增强；FCM结果证实PCA可以使PANC-1细胞的G2/M期细胞所占比例明显升高,而s期细胞所占比例显著性下降,PCA可使PANC-1细胞生长阻滞在G2/M期。(2)甲基化特异性PCR显示PANC-1细胞TNFRSF10C基因启动子CpG岛存在甲基化状态的异常表观学现象,逆转录PCR显示在人胰腺癌PANC-1细胞中TNFRSF10C基因低表达,表明人胰腺癌PANC-1细胞中TNFRSF10C基因启动子CpG岛甲基化可能是导致其表达沉默的一种机制。(3)甲基化特异化PCR证实PCA能够使人胰腺癌PANC-1细胞TNFRSF10C基因甲基化水平下降；反转录PCR和蛋白印迹技术结果显示TNFRSF10C基因使用PCA处理后在胰腺癌PANC-1细胞中表达升高。 结论：PCA可使人胰腺癌PANC-1细胞的生长抑制在DNA合成前期(G0/G1),可以明显抑制PANC-1细胞的分裂和增殖。TNFRSF10C基因启动子区CpG岛高甲基化导致该基因表达沉默或失表达是胰腺癌发病的可能机制之一；PCA能使TNFRSF10C基因启动子区域CpG岛甲基化状态转为低甲基化状态,并使TNFRSF10C基因活化并表达增多,验证了TNFRSF10C成为候选抑癌基因的理论,并为寻找新的抗肿瘤药物奠定了一定的理论基础。