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目的:课题组前期研究发现,LMP1可诱导鼻咽癌CNE2细胞呈现EMT现象及上调波形蛋白(Vimentin)的表达。本课题拟探讨Vimentin高表达对鼻咽癌CNE2细胞迁移侵袭的影响,为阐明鼻咽癌发病的分子机制提供实验资料。 方法:1.构建pcDNA3.1(+)/Vimentin载体(pcDNA3.1(+)为载体对照),分别瞬时转染鼻咽癌CNE2细胞,采用Western blot检测鼻咽癌CNE2细胞中Vimentin表达;2.光镜观察Vimentin高表达对鼻咽癌CNE2细胞形态的影响,通过Western blot检测Vimentin高表达后鼻咽癌CNE2细胞中TGF-β和E-cad(两者为EMT相关蛋白)的表达;3.利用划痕实验与Transwell迁移侵袭实验检测Vimentin高表达对鼻咽癌CNE2细胞迁移侵袭的影响。 结果:1.瞬时转染pcDNA3.1(+)/Vimentin载体后鼻咽癌CNE2细胞中Vimentin表达显著升高,CNE2细胞由鹅卵石样上皮细胞形态转化为梭形间质细胞形态,呈现EMT形态变化。2.Western blot结果显示,瞬时转染pcDNA3.1(+)/Vimentin载体后CNE2细胞中Vimentin表达显著升高,同时TGF-β表达也明显升高,而E-cad表达明显降低(P<0.05)。3.细胞划痕实验结果显示,Vimentin高表达CNE2细胞的迁移距离显著大于空载体及未转染对照组细胞(P<0.05);Transwell迁移侵袭实验结果显示,Vimentin高表达CNE2细胞的迁移率及侵袭率均高于空载体及未转染对照组细胞(P<0.05)。 结论:Vimentin通过上调TGF-β表达,下调E-cad表达,诱导CNE2细胞发生EMT,增强CNE2细胞的迁移和侵袭能力。