五种中国特有柑橘果实生物活性物质鉴定及抗氧化活性研究

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柑橘属植物作为一种重要的经济作物在全世界范围内被广泛种植。中国是柑橘属植物重要的起源地,具有丰富的柑橘资源。柑橘果实富含生物活性物质,常见的有类黄酮、类柠檬苦素、香豆素等,这些化合物具有抗氧化、抗炎、抗衰老、抗癌、预防老年痴呆症等功效,被广泛应用于食品、药品、化妆品等领域。生物活性物质分析鉴定的方法主要有高效液相色谱法、液相色谱与质谱联用法、超高效液相色谱与四级杆飞行时间质谱联用法等。目前,对中国特有柑橘果实资源中生物活性物质的分析报道较少,因此建立快速分析鉴定柑橘果实中生物活性物质的方法并评价柑橘果实抗氧化活性,不仅能够丰富和完善柑橘资源信息,而且对我国柑橘植物资源高效的利用和产业的发展都具有非常重要的意义。本研究选取了新生系3号椪柑、红橘、胡柚、梁平柚和小香橼五种中国特有柑橘成熟果实作为研究对象,利用UPLC-Q-TOF-MS对柑橘果实果皮和果肉中的生物活性物质进行了定性分析,同时采用DPPH、FRAP和ABTS三种检测方法对供试的五种柑橘果实果皮和果肉的抗氧化活性进行了评价,主要的研究结果如下:(1)以反相ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1×100 mm,1.7μm)为分析柱,为建立分离度好、用时短的洗脱程序,本实验对比不同的流动相溶液、色谱柱温度、流速和洗脱梯度对供试柑橘果实果皮和果肉甲醇提取物的分离效果的影响。最终确定的具体参数如下所示为柱温40 oC,流速0.4 mL·min-1,流动相体系为0.01%甲酸水溶液(A)-甲醇(B),梯度洗脱程序为:0~0.6 min,90%~80%A;0.6~5 min,80%~30%A;5~7 min,30%~10%A;7~8 min,10~90%A。该分析方法具有快速、高效、精确等优点,能够应用到分析鉴定柑橘果实极其副产品化学成分的研究领域中。(2)本研究运用最新的UPLC-Q-TOF-MS技术对供试柑橘果实果皮和果肉甲醇提取物中的化学成分进行了快速的定性分析。通过与标准品或已有文献报道,比对化合物的保留时间、紫外吸收光谱、高分辨的一级和二级质谱数据等信息,在五种柑橘果实中共鉴定出43种化合物,包括31种类黄酮、7种柠檬苦素类似物、1种香豆素和4种其他化合物。同时研究数据表明,不同柑橘果实果皮和果肉甲醇提取物中化学成分差异较大。(3)本研究利用DPPH、FRAP和ABTS三种检测方法评价了五种柑橘果实的抗氧化活性。实验发现,除了梁平柚果实外,其他柑橘果实果皮的抗氧化能力均强于果肉。利用综合抗氧化指数评价柑橘果实抗氧化综合能力,结果发现在果皮中,新生系3号椪柑果皮的抗氧化活性最强,其次为红橘果皮,小香橼果皮的抗氧化能力最弱;在果肉中,新生系3号椪柑果肉的抗氧化能力最强,其次为胡柚果肉,小香橼果肉的抗氧化能力最弱。
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