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网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)属于禽反转录病毒,除形成肿瘤外,还可导致免疫抑制,引起继发感染和混合感染频发,造成养禽业重大损失,目前尚未有商品化应用的疫苗或药物。TRIM62是TRIM/RBCC家族的一员,包括TRIM家族高度保守的RING、B-box、Coiled coil结构域,其C-末端为SPRY结构域。TRIM家族的很多蛋白都具有抗反转录病毒的作用,且其作用机制与其结构域密切相关。作为一种天然免疫因子,TRIM62在其他物种上的抗反转录病毒作用已有一定研究,如人TRIM62蛋白抗HIV-1复制,且其RING结构域缺失加强其对HIV-1的抑制等。基于此,本研究设计实验,研究鸡TRIM62对反转录病毒REV复制的抑制作用,明确其结构域的影响,分析TRIM62在抑制REV复制过程中的互作蛋白,为深入研究鸡TRIM62抑制禽反转录病毒复制的机制奠定基础。通过荧光定量PCR和Western Blot检测接毒不同时间点的细胞以及鸡各组织中TR IM62表达,明确REV复制对TRIM62表达的影响以及二者间关联性;分别转染TRIM62慢病毒重组载体以及shRNA表达载体,进行REV接种,检测其TRIM62和REV表达,从体外确定TRIM62对REV的抑制作用;以TRIM62过表达接毒细胞上清再次接种细胞,检测REV的表达,确定TRIM62对病毒粒子释放的影响;对60h胚龄鸡胚进行体内TRIM62慢病毒重组载体转染,雏鸡3日龄接毒,检测各组织REV表达,由体内确定TRIM62对REV的抑制作用;构建TRIM62结构域缺失突变体慢病毒并转染CEF细胞,接种REV,检测REV表达,确定各结构域对TRIM62抑制REV复制的影响;过表达TRIM62细胞接毒后,进行免疫共沉淀,经SDS-PAGE电泳分离出小肽,考马斯亮蓝染色后切下含蛋白胶块,通过液相串联质谱对蛋白进行定性分析,分析TRIM62在抑制REV复制时与其相互作用的蛋白的定性变化。结果显示,REV感染细胞TRIM62表达先下降,随着接毒时间延长逐渐升高,72h后再次下降,说明TRIM62在病毒复制不同阶段表达量不同。接毒鸡肝、肾、脾、法氏囊等器官中,TRIM62表达在一周时显著降低,随着接毒时间延长,到7周时则表现相反,暗示TRIM62作为重要蛋白参与机体抗REV的过程。体外TRIM62过表达以及TR IM62表达抑制证实,TRIM62能有效抑制病毒复制,且会降低病毒粒子的释放。体内T RIM62过表达能够有效抑制REV在各组织器官复制。TRIM62的四个结构域对其发挥抑制REV作用影响大小依次为SPRY结构域>RING结构域>B-box结构域>Coiled coil结构域。对质谱定性分析得到的蛋白进行差异比较,最终筛选出来的在病毒复制过程中与TRIM62具有相互作用的蛋白为18种,包括Arp2/3等。本研究表明TRIM62能有效抑制REV复制并减少病毒粒子的释放,SPRY结构域对TRIM62抑制REV复制的影响最大。TRIM62在抗REV感染过程中会引起包括Arp2/3在内的18种互作蛋白的定性变化,这为后续TRIM62抑制禽反转录病毒复制机制研究提供依据。