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脂肪酶(Triacylgycerol acylhydrolase, Lipase, EC3.1.1.3),是水解酶中的一种,普遍存在于自然界中。在现实应用中,微生物产生的脂肪酶是工业生产中使用到的所有酶中最重要的一种酶类,微生物脂肪酶具有以下特点：品种多、来源广泛、pH及温度范围广、生产周期短、底物专一性和催化活性高。因此可以说,目前对于脂肪酶的研究是当前科学界研究的热点。在自然界中绝大多数微生物都能够合成脂肪酶,但是这些微生物脂肪酶的合成能力却有差别,因此在实际生产中要达到工业化生产微生物脂肪酶的目的,就必须筛选与我们所需要的酶学性质相一致的产脂肪酶菌株,然而在实际的情况中,菌株的贫乏,尤其是优良菌株的缺少,已成为当今限制理论研究和工业化应用的因素之一。根据这种现象,为了能够筛选到优良的产脂肪酶原始菌株现在成为一项重要且必须的基础性工作。综上所述,本文对实验室采集到的土样进行了产脂肪酶菌株的筛选,主要工作包括以下三个方面：1、从武汉市郊蓖麻地土壤、荆沙河的底泥中取样,将处理过的土样经过富集、初筛、复筛的步骤,分离得到32株可利用三丁酸甘油酯的菌株,其中有15株在初筛平板上水解圈明显,选择水解圈直径与菌落直径比值较大的10株菌进行复筛,编号为HS-L1～S-L10,用比色法测定其脂肪酶的酶活,其中具有最高酶活的产脂肪酶菌株是HS-L6,酶活为5.177U/mL。2、将HS-L5和HS-L6进行形态学特征和生理生化鉴定,再作进一步的16s rDNA鉴定,运用Blast比对构建进化树,发现菌株HS-L5与粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的同源性高达99%,初步鉴定该菌株属于沙雷氏菌属(Serratia.sp);菌株HS-L6与绿脓杆菌(Pseudomonas aeruqionsa)的同源性高达100%的相似性,初步鉴定该菌株属于假单胞菌属(Pseudomonas.sp)。3、分别克隆菌株HS-L5和HS-L6的脂肪酶基因HS-Lip5和HS-Lip6, HS-Lip5的基因全长1842bp,编码氨基酸614个,蛋白质分子量为64.8kDa. HS-L5的脂肪酶序列经Blast比对分析,发现与Serratia marcescens SM6的LipA序列的同源性高达98%,经氨基酸序列的初步分析,HS-L5的氨基酸序列包含脂肪酶共有序列-G-X-S-X-G-,将HS-Lip5旨肪酶基因连接到表达载体pET-28a上,在E.coli中获得表达。HS-Lip6的基因全长2008bp,编码氨基酸669个,蛋白质分子量为70.8kDa。将HS-Lip6脂肪酶基因连接到表达载体pET-28a上,并在E. coli中获得表达。