论文部分内容阅读
随着畜牧业的发展,兽药（包括兽药添加剂）在降低发病率与死亡率、提高饲料利用率,促进生长等方面起到了十分显著的作用。但是,由于生产者科学知识的缺乏和经济利益的驱使,超标使用兽药的现象普遍存在。若人体长时间摄入低剂量的药品,会逐渐在体内蓄积并导致各种器官病变甚至癌变,药物残留对人体的影响主要表现在变态反应和过敏反应、致畸、致突变和致癌作用以及激素作用等方面。食品安全特别是畜产品的药物残留问题已引起了广泛关注,控制动物源性食品中药物残留已经成为目前确保动物性食品安全的一项重要措施。我国目前畜禽养殖存在着规模化程度不高,饲养管理水平较低,用药不规范、停药期不足等问题,不仅危害人体健康,而且由于药物残留量难以达到发达国家的要求,被许多国家退货或者销毁,从而严重影响我国动物性产品的出口贸易。近年来,我国高度重视这一问题,制定了严格的残留标准和休药期以限制抗生素在食品中的残留,采取法律、经济、行政和技术手段实行监控。为了有效地控制动物性产品中的药物残留,借鉴国外先进经验和技术,结合我国国情,研究、筛选出一套可行的抗生素类药物在动物组织中的残留量检测方法,对确保我国进出口贸易正常进行,保障人民身体健康,具有直接的经济效益和积极的社会意义。目前国内外采用的残留分析检测方法主要有理化检测法（包括HPLC、LC-MS、LC-MS/MS等仪器法）、微生物检测法、免疫检测法（包括ELISA、CLIA、RIA、EIA、FIA、EICA、CLEIA）等。理化检测法准确、稳定、可靠,可以作为标准方法,但仪器设备昂贵,样品前处理复杂,费时,费力,不易普及;微生物检测法往往会高出最高检测量（MRLs）,灵敏度不高。因此必须建立快速、灵敏、有效的检测方法。免疫检测法中的酶联免疫检测法（包括ELISA、EICA、CLEIA等）克服了以上方法的缺点,是一种快速、灵敏、方便、易普及的检测方法,有着广阔的发展前景。本论文旨在建立达氟沙星酶联免疫检测法（ELISA）,加替沙星电化学酶联免疫吸附法（ECIA）以及特布他林发光酶联免疫检测法（CLEIA）。在对达氟沙星的研究中,利用间接ELISA研究了达氟沙星抗体的亲和度、灵敏度、交叉反应及在鸡肝中达氟沙星回收率。经检测,IC50是2.0ppb,检测限为0.8ppb,线性范围为0.8-6.0ppb,该抗体仅对氟罗沙星和培氟沙星有较小的交叉反应（交叉反应率分别为20.6%和21.7%）,对其它喹诺酮交叉反应率较小;达氟沙星在鸡肝中的添加回收率在84.0-109.6%之间,批内变异系数低于15.3%,批间变异系数低于19.0%。在对加替沙星的研究中,利用间接EICA研究了加替沙星抗体的亲和度、灵敏度、交叉反应及在猪尿中加替沙星回收率。经检测,IC50是10ppb,检测限为1.0ppb,线性范围为1.0-100ppb;该抗体仅对洛美沙星、氧氟沙星和环丙沙星有较小的交叉反应（交叉反应率分别为3.0%,3.0%和1.9%）,对其它喹诺酮交叉反应率较小;加替沙星在猪尿中的添加回收率在93.0-117.0%之间,批间变异系数低于12.5%。在对特布他林的研究中,利用间接CLEIA研究了特布他林抗体的亲和度、灵敏度、交叉反应及在猪尿中特布他林回收率。经检测,IC50是1.0ppb,检测限为0.1ppb,线性范围为0.1-10ppb;该抗体仅对克伦特罗和沙丁胺醇有交叉反应（交叉反应率分别均为62.9%）,对其它β-兴奋剂交叉反应率较小;特布他林在猪尿中的添加回收率在83.8-112.9%之间,批内变异系数低于19.9%,批间变异系数低于7.2%。在对呋喃它酮的研究中,利用间接CLEIA研究了呋喃它酮抗体的亲和度、灵敏度、交叉反应及在自来水中呋喃它酮回收率。经检测,IC50是5.0ppb,线性范围为0.5-50ppb;该抗体仅对NPAOMZ、AOMZ和呋喃唑酮有交叉反应（交叉反应率分别为45.5%,41.7%和4.1%）,对其它硝基呋喃类药物交叉反应率较小;呋喃它酮在自来水中的添加回收率在90.3-111.8%之间,批内变异系数低于11.8%,批间变异系数低于16%。通过本课题的研究,成功地制备了用于检测达氟沙星、加替沙星以及特布他林的高特异性的多克隆抗体,利用这些抗体,本研究建立了加替沙星、呋喃西林的快速灵敏的酶联免疫吸附检测法,为生产国产化试剂盒和电化学传感器奠定了基础,是食品安全检测的一种比较好的筛选方法,对于降低检测成本、加快检测速度、提高畜产品质量、出口创汇具有重要的意义。