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芦荟苷是芦荟中的一种主要的生物活性成分,属于蒽醌类化合物,主要存在于芦荟叶片底部表皮附近。本文旨在建立从库拉索芦荟中分离纯化芦荟苷的方法,并研究其抑菌及抗氧化活性。
提取:研究超声波法提取库拉索芦荟中芦荟苷的工艺条件。通过对提取时间,提取温度,料液比,乙醇浓度的单因素实验,确定了提取芦荟粉末中芦荟苷的条件,通过L9(34)正交实验,以芦荟苷得率作为考察指标,进一步优化工艺条件。结果表明:提取工艺为:乙醇浓度80%,提取时间为45min,料液比为1:25,提取温度45℃。按照该提取工艺提取,芦荟苷的提取率为11.18mg/g。
在确定了该提取工艺的基础上,研究了酸化条件、超声波输出功率、提取级数对提取率的影响。结果表明:醋酸浓度为1moL/L,室温条件下酸解30min,功率360W,提取三次,芦荟苷的提取率为14.9mg/g。
纯化:研究了6种大孔吸附树脂对芦荟苷的静态吸附和动态洗脱性能,结果表明:在所选的树脂中HZ-801型树脂吸附与洗脱效果最佳。优化出的最佳工艺条件为:在上样浓度为0.2765mg/mL的条件下,上样体积为520mL,洗脱速度2mL/min,先用双蒸水洗涤至流出液为无色,再用10%的乙醇溶液洗涤至流出液为无色,后用3BV60%乙醇溶液洗涤并收集洗脱液,得到芦荟苷溶液,经浓缩、冷冻干燥后,进行纯度分析。在此条件下芦荟苷纯度为10.16%,纯化倍数达到14.72,回收率为86.3%。
将粗分离物进一步过层析硅胶柱精制。选择几种不同体积比的展开剂,通过TLC法观察展开效果,最终确定乙酸乙酯:甲醇(6:1)为最佳的展开剂,柱色谱条件为:硅胶柱规格为(20×400mm),上样量为0.0543g,流速一秒一滴,每20mL收集一管,用TLC法追踪检测芦荟苷流出的位置,收集含有芦荟苷的流出液,浓缩,冷冻干燥。得到芦荟苷精制品。对精制品进行定性检测——Borntragers反应和红外吸收光谱检测。结果表明:Borntragers反应中,醚层由黄色褪为无色,氢氧化钠层显红色,表明有芦荟苷存在;精制品与芦荟苷对照品的吸收光谱很相似,匹配度达到了90.86。
另外,初步研究了高速逆流色谱法对芦荟苷的纯化。结果表明:在进样10min后开始出峰,几个峰清晰可见,没有重叠也没有“毛刺”,有效成分得到了完全的分离。收集各峰所对应的流出液,用TLC法检测,确定芦荟苷溶液流出的位置。
活性:将提取的芦荟苷进行抑菌及抗氧化活性实验,采用牛津杯法研究芦荟苷的抑菌性,结果表明:当芦荟苷的质量分数为0.8%时,对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌有轻微的抑制作用。
采用DPPH法和超氧阴离子自由基(O2·-)清除法研究芦荟苷的抗氧化活性,结果表明:DPPH法中,在样品浓度均为0.125mol/L的条件下,抗坏血酸对DPPH溶液的抑制率达到了90%以上,粗品抑制率为22.29%,粗分离物抑制率为51.94%,而芦荟苷精制品及对照品的抑制率仅为12.47%和3.99%。
超氧阴离子自由基(O2·-)清除试验中,粗品经过大孔树脂分离纯化后,对O2·-清除的IC50值由21.80mg/mL提高到了4.17mg/mL。