本论文的目的是初步建立鱼肉样品和水样中己烯雌酚(DES)酶联免疫吸附分析(ELISA)方法,为食品安全检测和环境监测提供技术依据。　　 实验首先合成了2种具有不同碳链长度的己烯雌酚半抗原:正丁酸己烯雌酚单醚(DES-CP)和乙酸己烯雌酚单醚(DES-CME),通过分析半抗原的核磁图谱、重水交换图谱以及红外光谱,对其结构进行了鉴定。采用混合酸酐法将半抗原与BSA偶联制备了免疫原；采用活性酯法将半抗原与OVA偶联制备了包被原,对不同的偶联物进行了紫外光谱鉴定并估算了半抗原和载体蛋白的偶联比。　　 用DES-CP-BSA、DES-CME-BSA免疫健康的Balb/c雌性小鼠,其中DES-CP-BSA制备的多抗血清,以间接ELISA(iELISA)测定其效价,大于6.4×105;并对己烯雌酚多抗血清的特异性进行了研究,间接竞争性ELISA法(icELISA)测定己烯雌酚多抗的抑制中浓度为IC50=1.08 ng/mL,检测限IC20=0.01 ng/mL。对已烯雌酚多克隆抗体的特异性进行了研究,多克隆抗体与己烯雌酚类似物己烷雌酚的交叉反应为6.52％,与双烯雌酚的交叉反应为5.13％,与17B-雌二醇、孕酮、雌酮的交叉反应小于0.1％。用icELISA分析添加水样中DES含量,样本通过简单的稀释降低了介质干扰,测定水样的回收率为86-120.2％,变异系数为4.2-13.2％,添加值与icELISA检测结果高度一致。　　 用DES-CP-BSA免疫Balb/c雌性小鼠,再将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤融合,经过3次亚克隆,筛选到一株稳定分泌己烯雌酚单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为2D87C412C7。采用秋水仙素阻断法对杂交瘤细胞染色体进行了分析,2D87C412C7染色体数目为45-50对左右。iELISA鉴定2D87C412C7分泌的球蛋白为IgG1亚类。将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中,获得含大量单克隆抗体的腹水,以iELISA法测定腹水效价大于106,培养上清效价为1:640,并用饱和硫酸铵盐析单克隆抗体.单克隆抗体稳定性检测实验结果表明杂交瘤细胞能稳定分泌单克隆抗体.对己烯雌酚单克隆抗体的特异性进行了研究,icELISA测定单克隆抗体的抑制中浓度为IC50=9.8 ng/mL,检测限IC20=2.3 ng/mL,工作范围为2.3-41.9 ng/mL,与双烯雌酚、己烷雌酚的交叉反应分别是21.7％和44.2％,与17B-雌二醇、孕酮、雌酮的交叉反应小于0.01％。己烯雌酚的单克隆抗体与两种载体蛋白(OVA、BSA)无任何交叉反应。　　 对分析缓冲液中离子强度、pn值、Tween20含量、有机溶剂含量以及样品基质对icELISA法的影响进行了分析。随着分析缓冲液盐离子浓度的升高,抗体抗原亲和力减弱,检测灵敏度下降,Amax值降低,IC50值增高。在盐离子浓度为O的时候,抗原抗体之间的竞争性反应受到极大的影响,形成不了线性关系；在分析缓冲液pH值4.4-9.4的范围内,IC50和Amax没有明显的差异,这表明一定范围内的pH值的变化不会对分析结果造成严重影响；随着分析缓冲液中有机溶剂含量的增加,icELISA检测的灵敏度呈下降趋势。分析缓冲液中甲醇含量在15％以内时,乙腈含量在5％以内时,对免疫分析灵敏度的影响比较小。另外,分析缓冲液中甲醇含量在0-20％范围内,Amax值影响不是很明显,乙腈含量超过10％时,Amax值就明显降低。分析缓冲液中Tween20含量对DES的icELISA没有明显的影响。当鱼肉基质被稀释20倍的时候,可以基本上消除基质对icELISA的干扰。试验还进行了鱼肉样品己烯雌酚添加回收测定,在鱼肉中添加己烯雌酚的浓度为80 ng/g和120 ng/g时,对icELISA和HPLC检测结果进行分析比较,鱼样icELISA法测定回收率为71.3％和77.6％,变异系数为7.4％和9.8％,HPLC法的回收率为73.67％和74.1％,变异系数为5.1％和10.2％,两种方法分析结果相近；不同来源水样,添加单抗工作范围浓度的DES.调节离子浓度后用于icELISA分析,添加回收率为72.6-1023％,变异系数为4.8-11.3％.分析检测结果符合检测精度要求。　　 本论文制备了己烯雌酚的多克隆抗体、单克隆抗体,在国内外首次对DES的icELISA检测条件进行评估,并初步建立了icELISA检测方法,本实验所制备己烯雌酚的多克隆抗体的检测限远低于欧盟、美国以及我国农业部对食品动物中己烯雌酚最大允许残留量。制备的单克隆抗体能满足国内残留检测要求。本实验为己烯雌酚检测试剂盒的开发提供了研究基础。