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【研究背景】肾细胞癌(Renal cell carcinoma,以下简称肾癌)是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率逐年增高,发病年龄越来越年轻,已成为影响市民健康主要威胁之一。肾癌恶性度极高,约三分之一患者在初诊时已发生转移,给治疗带来很大困难;肾癌对常规的放疗及化疗不敏感;免疫治疗(如:IL-2和IFN-α)也仅对约10-20%患者有效,且价格极为昂贵,给家庭﹑社会带来沉重经济负担。肾癌诊治的一大瓶颈是其发病的机理目前还尚不明确,没有明确的治疗方向。因此,探寻肾癌的发病机理是当下临床上急切需要解决的医学难题之一,这也是寻找新的、有效的肾癌治疗方法的主要切入点。本研究主要探讨CARD10对人肾癌细胞的IGF-1/AKT信号通路的激活的影响。【研究方法】1.细胞培养,正常肾小管细胞HK-2细胞及肾癌细胞786-O细胞株培养于RPMI1640培养基,肾癌细胞株ACHN和A498,培养于DMEM培养基中,HK-2和ACHN细胞株用IGF-1(200 ng/ml)分别处理0,5,10 and 15分钟后用于建立PAKT过表达的细胞株用于转染。2.质粒构建和瞬时转染,特异性CARD10shRNA用来转染A496和ACHN肾癌细胞株。3.通过免疫组化方法检测CARD10在肾癌组织及癌旁组织标本中的表达情况。4.Western blot检测抑制或者抑制表达CARD后肾癌细胞中的P-AKT蛋白的表达情况。【研究结果】1.我们在15对肾癌组织及癌旁组织中利用免疫组化实验方法发现CARD10在肾癌组织中表达明显高于癌旁组织;提取肾癌组织蛋白后利用蛋白印迹方法同样发现CARD10蛋白在肾癌组织中表达明显高于癌旁组织。2.为了研究CARD10在肾癌细胞中的生物学功能,我们利用细胞培养培养了正常肾小管上皮细胞HK-2细胞及肾癌细胞A498、ACHN、786-O细胞株,提取蛋白后,利用蛋白免疫印迹方法发现CARD10在肾癌细胞中的表达强于正常肾小管上皮细胞中的表达;为了探寻CARD10和IGF-1/AKT信号通路之间的关系,我们实验研究发现P-AKT在肾癌细胞A498、ACHN、786-O中的表达也是强于在正常肾小管上皮细胞HK-2中的表达。3.之前的研究工作已经表明肾癌的激活受IGF-1的刺激;我们进一步研究发现在肾癌细胞中经过IGF-1刺激后P-AKT表达增加,而CARD10证实在肾癌细胞表达增加,为了研究两者之间的潜在机制,我们利用特异性sh RNA敲低CARD10后发现P-AKT的表达量也相应减低;而总的AKT表达没有什么变化;以上结果表明CARD10促进了P-AKT的活化,说明CARD10通过IGF-1/AKT信号通路促进肾癌细胞的生长和增殖。【结论】1.CARD10蛋白在肾癌细胞中高表达;2.CARD10蛋白通过调节IGF-1/AKT信号通路促进肿瘤细胞生长增殖。