实验目的：　　本实验使用黄芪甲苷、水蛭素不同配比作用于高糖环境下的HK-2细胞，观察其形态、存活率、凋亡状况，采集各相关目的蛋白因子的表达状况，并进行统计学分析，从分子水平初步探究双药协同作用在HK-2细胞的转分化过程中的干预机制。　　实验方法：　　实验分组：正常对照组（含5.6mmol·L-1glucose），以下用NG表示；甘露醇干预组（含5.6mmol·L-1glucose和24.4mmol·L-1mannitol），以下用MG表示；高糖组（含30mmol·L-1glucose），以下用HG表示；黄芪甲苷单药组（含30mmol·L-1glucose，黄芪甲苷浓度为400ug/ml），以下用DH表示；水蛭素单药组（含30mmol·L-1glucose，水蛭素浓度为800ug/ml），以下用DZ表示；双药协同组（含30mmol·L-1glucose，黄芪甲苷:水蛭素=1:2黄芪为200ug/ml，水蛭素为400ug/ml），以下用HZ表示。　　1.将NG、MG和HG三组细胞常规培养至对数生长期后，分别观察显微镜下细胞的形态学表现。　　2.使用MTT法分别检测黄芪甲苷、水蛭素不同配比作用于高糖环境下的HK-2细胞存活率。　　3.使用Hoechst染色法，在荧光显微镜下分别观察NG、HG、DH、DZ、HZ各组细胞经药物干预后，细胞表现出的凋亡形态。　　4.使用SABC免疫组化，通过显微镜下拍照，观察NG、HG、DH、DZ、HZ各组细胞中各目的蛋白因子的染色状况，分析其存活、增殖状况及个体形态受到的不同程度的干预状况。　　5.通过Western-Blot实验，得到NG、HG、DH、DZ、HZ各组细胞目的蛋白的条带结果，统计分析各组间呈现出的统计学差异。　　实验结果：　　1.HK-2细胞不因为甘露醇的高渗透压状态发生形态或增殖异常，高糖培养下的HK-2细胞增殖速度迅速且个体细胞边缘不齐整，细胞形态具有改变倾向。　　2.根据MTT检测显示，本实验最终选择黄芪甲苷、水蛭素整体浓度为600ug/ml，协同组配比的药物浓度为黄芪甲苷∶水蛭素=1∶2，对各组细胞进行协同干预并进行后续实验。　　3.Hoechst染色结果表示，高糖组细胞在增殖迅速的情况下存在凋亡状态，双药协同组可有效改善细胞凋亡状态，调整细胞个体边缘不齐整形态，且水蛭素单药组也表现出此类积极作用。　　4.经SABC免疫组化实验后，苏木素复染的E-cadherin，β-catenin，TGF-β1，Smad3，Wnt4，α-Sma各蛋白因子表达在高糖环境下的表达分别为：其中E-cadherin减弱，其余均有强烈的增强表达。经双药协同作用后，上述异常改变均有改善。　　5.Western-Blot实验中，E-cadherin，β-catenin，TGF-β1，Smad3，Wnt4，α-Sma各蛋白因子表达在高糖环境下除E-cadherin减弱外，其余均有明显的增强表达，此种表达在各蛋白各自组间具有统计学差异，且P＜0.05。药物干预组对比高糖组同样均有表达改善，且P＜0.05，具有统计学的差异。　　实验结论：　　黄芪甲苷、水蛭素双药协同作用，能够减缓细胞凋亡，改善高糖所致的E-cadherin表达降低状况，同时降低β-catenin，TGF-β1，Smad3，Wnt4，α-Sma各蛋白因子表达，实验结果显示这组药对可能通过调节TGF-β/Smad和Wnt/α-Sma通路参与了HK-2细胞转分化改善的过程。