【摘 要】
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将双35S启动子引导组成表达的5末端缺失381bp的马铃薯Y病毒复制酶(PVYNIb)基因和CoYMV启动子引导韧皮部特异表达的雪花莲凝集素(GNA)基因构建成双价植物表达载体,采用叶盘法,
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将双35S启动子引导组成表达的5末端缺失381bp的马铃薯Y病毒复制酶(PVYNIb)基因和CoYMV启动子引导韧皮部特异表达的雪花莲凝集素(GNA)基因构建成双价植物表达载体,采用叶盘法,通过农杆菌介导法将其分别转化烟草K326和马铃薯紫花白,获得一批再生植株.PCR及Southernblot分析表明,NIb基因和GNA基因已经成功的整合到烟草和马铃薯的基因组中.转基因烟草的Northernblot和Westernblot结果表明,GNA在转基因烟草中得到了有效的表达.对双价转基因烟草摩擦接种病毒进行了抗病性试验,同时进行了离体和整株抗蚜试验,结果表明对PVY-C的抗性植株占试验植株的86﹪,对桃蚜(Myzuspersicae)的抗性植株占试验植株的63﹪,有51﹪的双价转基因烟草植株对PVY的侵染和桃蚜的取食均具有较强的抑制作用.首次将抗病基因和抗虫基因相结合,得到了双抗转基因植物.双价转基因马铃薯的病毒抗性和蚜虫抗性正在研究中.利用PVYCP基因内第272位的XhoI位点,经限制酶消化后得到5末端缺失272bp的CP突变体,称为△CP基因.转基因烟草分别用PVY-C、PVY和PVY<0>摩擦接种后,症状的观察和ELISA检测结果表明,转基因植物中,对这三个株系的PVY病毒均存在抗性植株,个别植株可对其中两个株系产生较高的抗性Westernblot分析表明,在抗病植株和感病植株中均有△CP基因的表达,抗性的产生与转基因蛋白表达之间是否有关还有待于进一步深入研究.为进一步研究PVYCP基因介导的植物抗病毒机理,通过Northernblot检测了已经证明的转基因植株在接种病毒前和接种病毒后转基因的mRNA含量变化,结果表明,抗病植株在接种病毒后,转基因的mRNA含量大大降低;感病植株接种病毒后转基因的mRNA含量甚至升高了.表明PVYCP基因介导的抗性可能是在RNA水平下作用的,在抗病植株中可能发生了由转基因的转录后沉默而引起的mRNA的特异性降解.
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