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第一部分血浆外泌体Cripto-1在胃癌诊断和预后判断中的应用价值分析目的:胃癌(astric cancer,GC)是一种常见的恶性肿瘤,由于发现较晚、具有侵袭性、治疗反应差导致胃癌预后较差,严重危害人们的生命健康。外泌体通过传递蛋白质、RNA和DNA等功能分子参与细胞间的通讯,在肿瘤液体活检中具有广阔的应用前景。然而,目前Cripto-1或人畸胎瘤衍生生长因子1(tdgf1)在循环外泌体中的表达情况及外泌体Cripto-1在GC中的临床价值尚无相关报道。为此,本课题探究外泌体Cripto-1在GC患者血浆中的表达及其在GC诊断及预后判断中的价值。方法:1.运用超速离心法提取GC细胞系SGC7901和BGC823培养上清中外泌体和血浆外泌体,通过电镜观察、粒径分析和western blot实验进行鉴定。Western blot实验观察Cripto-l在GC细胞系及释放外泌体中的表达情况。2.建立exo-ELISA方法,检测118例GC患者、62例非萎缩性胃炎、26例胃息肉、62例萎缩性胃炎和60例健康对照者血浆外泌体Cripto-1表达水平。3.采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆外泌体Cripto-1、糖类抗原72-4(CA72-4)、癌胚抗原(CEA)对GC的诊断效能。4.绘制Kaplan-Meier曲线,分析血浆外泌体Cripto-1表达水平与GC患者5年生存率的相关性。5.建立COX多因素回归模型,分析血浆外泌体Cripto-1在GC预后判断中的价值。结果:1.血浆外泌体Cripto-1在GC组升高最明显,与其余四组比较,差异有统计学意义(P<0.05);临床病理信息分析显示,血浆外泌体Cripto-1表达水平与患者年龄和肿瘤的侵袭深度成正相关(P<0.05)。2.ROC曲线表明,血浆外泌体Cripto-1的ROC曲线下面积(AUC=0.763)对GC的诊断效能高于CEA(AUC=0.621)和 CA72-4(AUC=0.641)。采用最佳 cut-off 值(0.765)时,血清外泌体Cripto-1对GC诊断的敏感性和特异性分别为80.5%和69.1%(P<0.001)。3.Kaplan-Meier分析显示高水平血浆外泌体Cripto-1与GC病人的5年生存率呈负相关(P<0.05);此外,血浆传统肿瘤标志物CEA高表达组患者5年OS明显低于低表达组患者的5年OS(P<0.05);CA 72-4的含量与GC病人的5年OS无统计学上相关性(P>0.05)。4.多因素COX回归模型分析显示肿瘤淋巴结转移、高水平的血清CEA和高水平血浆外泌体Cripto-1是GC危险预后影响因子。结论:本研究成功建立了检测人血浆外泌体Cripto-1的方法。血浆外泌体Cripto-1对GC的诊断价值高于传统的肿瘤标志物CEA和CA72-4,并且对GC患者的预后判断具有一定的指导意义。第二部分Cripto-1作为恶性肿瘤的预后预测因子:系统综述和荟萃分析目的:研究表明,Cripto-1肿瘤发生发展中具有重要作用,已报道在肺癌、结直肠癌、乳腺癌、GC、胰腺癌、膀胱癌、肾癌、肝癌等多种癌组织中高表达,并且与预后相关。本文的目的在于通过系统综述和荟萃分析来评价Cripto-1表达水平与癌症患者预后的相关性。方法:1.由两位独立的研究员通过计算机检索1994年1月至2019年9月期间PubMed、Embase和Web of Science等电子数据库中的相关文献。2.建立纳入和排除标准筛选文献,以总生存期(OS)为主要评价指标,无进展生存期(PFS)、无病生存期(DFS)和无复发生存期(RFS)为次要评价指标。3.使用严格的审查表来评估纳入文献的质量。4.风险比(HR)及关联95%可信区间(95%CI)用来计算合并的效应量。使用Stata 12.0进行所有的统计分析。结果:本研究共纳入11篇文章,含2358名受试者。统计分析表明,Cripto-1高表达患者总生存期低于低表达患者(HR=2.25,95%CI:1.67-3.03)。Cripto-1表达水平较高预示着癌症进展较快。Cripto-1高表达患者更易发生淋巴结转移和远处转移,合并的风险比(HR)分别为2.22(95%CI:1.47-3.36)和2.48(95%CI:1.52-4.04)。结论:本研究表明,高水平表达Cripto-1癌症患者,整体生存率及无进展生存期较短,说明Cripto-1表达水平与癌症患者预后密切相关。Cripto-1有望成为癌症预后评估的一种潜在标志物,对癌症患者的治疗预后评估提供指导意义。