论文部分内容阅读
银屑病(Psoriasis Vulgaris, PV),中医称为“白疕”,俗称牛皮癣,是人类常见的难以治愈的慢性炎症性皮肤病。银屑病患者遍布世界各地,不同民族、性别、年龄均可发病,春冬季节易复发或加重,其发病率近年来呈明显升高趋势。该疾病的发病机制非常复杂,遗传流行病学和遗传学研究均证实,它是一种多因子遗传模式的复杂疾病,涉及多个基因间的相互作用及基因与环境的交互作用。随着国内外学术界在小分子RNA领域研究的逐步深入,发现多种miRNA在皮肤生理病理等过程中发挥了极其重要的作用。通过前期研究我们也发现miRNAs在银屑病皮损、单个核细胞中均存在特异性差异表达。近年来,对正常人与不同疾病的患者血浆中miRNAs进行检测,发现存在差异性表达的miRNAs,并且随着生理情况、疾病种类以及病程的长短而变化,这就证实血循环miRNA是潜在的诊断标志物。所以,从基因层面探讨银屑病的早期诊断、治疗及预防等课题势必会成为业界今后研究的主要方向之一。目的:运用文件检索,确定出10个与寻常型银屑病发病机制相关的miRNAs,再通过RT-qPCR技术筛选出外周血浆中差异表达的miRNA,为后期差异表达miRNA生物信息学分析提供进一步的线索,也为银屑病早期诊治提供思路。同时观察中药竹黄颗粒治疗寻常型银屑病患者前后血浆差异表达miRNA及血清细胞因子的表达变化,探索中医中药治疗寻常型银屑病的作用机制,为中医中药防治银屑病提供客观依据。方法:第一部分召集10名银屑病患者和10名健康体检者,先采集5例病患和5例正常体检者外周血浆样本。并用Trizo法提取RNA,检测总量,再通过miRNA RealTime RT-PCR实验验证10个miRNA在正常人与银屑病患者血浆中的表达差异,确定出5个差异倍数大于4的miRNA,进而在其余标本中用同样的的方法进行再次验证。第二部分召集48名寻常型银屑病志愿者进行2个月竹黄颗粒剂治疗。计算治疗前5个差异miRNA及炎性细胞因子与PASI积分的相关性。并分析治疗前后miRNA表达变化,同时采用ELISA检测治疗前后血清细胞因子的浓度差异。结果:1、银屑病患者外周血浆中存在差异表达的]miRNA,其中5个特异性miRNA(miR-146a, miR-155> miR-210、miR-142-3p、miR-181a)分别呈现出上调下降的趋势。2、miR-146a、miR-155、miR-210与PASI积分呈正相关;miR-142-3p.miR-181a与PASI积分呈负相关。炎性因子里除了IL-4、IL-10呈现出负相关,其余均表现正相关。3、竹黄颗粒治疗寻常型银屑病,总有效率达70.83%,且对差异表达的5个miRNA和炎性细胞因子均能调控。结论:1、寻常型银屑病外周循环血浆中存在差异表达的miRNA,我们通过RT-qPCR验证了miR-146a等5个差异性niRNA;2、差异表达的5个miRNA以及炎性细胞因子与PASI积分呈现出或正或负的相关性;3、中药竹黄颗粒剂治疗银屑病疗效显著;4、中药竹黄颗粒剂对4个特异性miRNA (miR-146a、miR-155、miR-210、 miR-142-3p)有显著性调控作用,对miR-181a改变不明显;炎性细胞因子中除了IL-10外其余均有调控作用。5、为下一步开展miRNA靶基因功能及分子标志物研究提供了实验基础。