研究目的以前研究认为Runx2蛋白在维持骨母细胞的分化和骨骼形态的过程中起着重要的作用,然而有关Runx2在乳腺癌的转移中的调控作用还不是很明确。上皮间质转化(EMT)认为是参与肿瘤发生侵袭转移的重要步骤。本研究主要探讨Runx2蛋白及EMT相关蛋白如Snail蛋白,E-cadherin蛋白在乳腺癌肿瘤组织中的表达情况,以及分析Runx2,Snail,E-cadherin的表达与肿瘤患者临床病理参数之间的联系,为评估肿瘤患者预后提供有效标志物,并初步探讨Runx2在EMT中可能发挥的作用。研究内容分析Runx2,Snail,E-cadherin在肿瘤组织标本中的细胞定位情况及其与预后的关系;Runx2真核表达载体的构建;构建Runx2高表达肿瘤细胞系;运用干扰Runx2构建Runx2降表达肿瘤细胞系。以及研究Runx2对EMT相关指标的表达调控关系。研究方法本研究首先应用免疫组织化学技术将肿瘤组织标本中Runx2,Snail,E-cadherin蛋白染色,通过细胞显微镜观察其在胞浆、胞核中的着色情况,记录所用标本患者临床病理数据,随访记录患者生存时间。利用SPSS20.0统计软件分析Runx2,Snail,E-cadherin蛋白表达亚细胞定位与肿瘤患者重要临床病理参数之间的关系,利用Kaplan-Merier生存曲线分析Runx2,Snail细胞核表达水平与患者预后生存差异,绘制生存曲线。进而,我们通过体外实验研究Runx2活化的具体作用机制,运用PCR技术扩增目的基因Runx2,Snail。并通过与真核表达载体连接,构建Runx2真核表达载体。表达质粒利用非脂质体Fu GENE?HD Transfection Reagent介导转染Runx2过表达质粒,即构建Runx2高表达肿瘤细胞株。我们购买了Runx2干扰质粒,并且通过转染构建了Runx2降表达的细胞株。应用qRT-PCR观察Runx2对EMT相关基因的表达调控关系。我们的研究第一次探讨了Snail与Runx2在乳腺癌组织表达的相关性,并研究了联用它们的表达情况对乳腺癌预后的预测价值。研究结果我们发现:Runx2蛋白细胞核表达与乳腺癌患者淋巴结转移情况、雌激素水平密切相关,是不良预后因素。Snail的细胞核高表达与E-cadherin的低表达与乳腺癌的淋巴结转移密切相关,是预后不良因素。Runx2,Snail,E-cadherin的表达相关分析发现,E-cadherin与Runx2,Snail的表达呈负相关,Runx2与Snail的表达呈正相关。Runx2和Snail同时细胞核高表达的患者的E-cadherin表达水平更低,具有更差的5年无病生存率(DFS)和5年的总生存率(OS)。研究结论乳腺肿瘤细胞发生上皮间质转化过程中,Runx2,Snail蛋白胞核表达与乳腺癌患者淋巴结转移情况、雌激素受体密切相关,是不良预后因素。联合应用Runx2和Snail,可以作为一个预测乳腺癌患者的生物标志物。