【摘 要】
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胃癌是一种消化道恶性肿瘤,目前仍是一个重要的癌症致死原因,寻找胃癌中的有效治疗靶点分子,对于胃癌早期诊断与治疗具有非常重要的意义。肌动蛋白结合蛋白(ANLN)基因是一种能够影响细胞分裂的基因。我们探讨ANLN基因过表达/沉默对胃癌细胞增殖、凋亡及周期的影响;明确ANLN基因对DNA损伤修复的影响;ANLN基因对S期检查点中ATR信号通路的调节作用;最终明确ANLN基因下调对胃癌发展的影响。首先,我
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胃癌是一种消化道恶性肿瘤,目前仍是一个重要的癌症致死原因,寻找胃癌中的有效治疗靶点分子,对于胃癌早期诊断与治疗具有非常重要的意义。肌动蛋白结合蛋白(ANLN)基因是一种能够影响细胞分裂的基因。我们探讨ANLN基因过表达/沉默对胃癌细胞增殖、凋亡及周期的影响;明确ANLN基因对DNA损伤修复的影响;ANLN基因对S期检查点中ATR信号通路的调节作用;最终明确ANLN基因下调对胃癌发展的影响。首先,我们通过数据库获取231例胃腺癌及胃管状腺癌组织中ANLN表达水平相关生存率情况数据、407例胃癌与正常胃组织及27对配对胃癌组织中ANLN表达水平数据;免疫组化检测55例胃癌组织中ANLN基因的蛋白表达情况。其次,通过Western blot和实时荧光定量PCR检测胃癌细胞株SGC-7901/MGC-803及正常胃粘膜细胞株GES-1中ANLN基因的表达水平;CCK-8实验检测沉默/过表达ANLN基因对胃癌细胞SGC-7901/MGC-803增殖的影响;流式细胞术实验检测沉默/过表达ANLN基因对胃癌细胞SGC-7901/MGC-803周期和凋亡的影响;彗星实验检测沉默/过表达ANLN基因对胃癌细胞SGC-7901/MGC-803的DNA损伤的影响;Western blot检测沉默/过表达ANLN基因后下游ATR信号通路蛋白变化水平。最后通过CCK-8实验检测过表达ANLN基因后加入CGK733(ATR信号通路抑制剂)对胃癌细胞SGC-7901/MGC-803增殖的影响;流式细胞术实验检测过表达ANLN基因后加入CGK733对胃癌细胞SGC-7901/MGC-803周期和凋亡的影响;彗星实验检测过表达ANLN基因后加入CGK733对胃癌细胞SGC-7901/MGC-803的DNA损伤的影响;Western blot检测过表达ANLN基因后加入CGK733后下游ATR信号通路蛋白变化水平。数据库数据显示胃正常组织中ANLN表达水平显著低于胃癌组织且ANLN高表达会显著降低胃癌患者的总生存期;免疫组化实验显示ANLN基因表达与胃癌肿瘤大小及胃癌分期有显著相关性。Western blot实验和PCR实验结果显示胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803中ANLN的表达水平显著高于正常胃粘膜细胞株GES-1;CCK-8实验结果显示沉默ANLN基因会降低细胞活力(p<0.05);过表达ANLN基因则会增强细胞活力(p<0.05)。流式细胞术显示过表达ANLN基因凋亡率下降(p<0.05),沉默ANLN基因使凋亡率上升(p<0.05)同时细胞G1期细胞量下降,S期细胞增加;彗星实验结果显示沉默ANLN基因后DNA损伤加剧,过表达ANLN后细胞损伤情况无明显变化;过表达或沉默ANLN的Western blot实验提示过表达ANLN基因后p-ATR/p-chk1/p-cdk2表达显著下调,p-cdc25a/cyclin E1表达显著上调,而沉默ANLN基因后结果相反。另外,过表达后加CGK733会降低细胞活力(p<0.05)、增加凋亡率(p<0.05)同时细胞G1期细胞量下降,S期细胞增加及DNA损伤加剧。ANLN过表达后加CGK733后p-ATR/p-chk1/p-cdk2表达显著上调,p-cdc25a/cyclin E1表达显著下调。综上所述,ANLN基因过表达可以促进胃癌细胞的增殖,抑制细胞凋亡;ANLN基因下调则出现相反的效果。抑制ANLN表达会使细胞阻滞在S期。ANLN基因通过S期内检查点ATR信号通路调控DNA损伤修复,ANLN基因可能成为胃癌靶向治疗新的靶向基因。
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