莱克多巴胺荧光微球免疫层析快速检测方法的建立

来源 :暨南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zht20090907
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目的:依据免疫竞争层析方法的原理,建立莱克多巴胺(RAC)荧光微球免疫层析快速检测方法。研制莱克多巴胺荧光微球免疫层析试纸条,用于猪尿中莱克多巴胺残留的检测。方法:采用饱和硫酸铵沉淀法纯化抗RAC单抗小鼠腹水,并用BCA试剂盒测定其抗体蛋白浓度。以EDC作为偶联剂,将本实验室制备的抗RAC单抗偶联到商用聚苯乙烯荧光微球表面,合成出荧光微球抗体复合物。将标记好的复合物喷涂于结合垫上;采用活性酯法合成RAC-BSA检测抗原并将其包被在NC膜表面作为检测线(T线);羊抗鼠IgG包被在硝酸纤维素(NC)膜表面作为质控线(C线);筛选并优化复溶液及样品垫预处理液中的各项成分及浓度。将结合垫、吸水纸和处理过的样品垫最后组装成试纸条。试纸条检测过程中RAC-BSA与待测样品中RAC竞争结合有限的荧光微球标记RAC单抗,如果样品中的RAC含量多则其结合荧光微球标记的抗体多,则结合到T线的荧光微球抗体复合物越少,于450nm激发光下观察,则T线的荧光强度越低,因此可根据荧光强度的强弱检测判断样品中RAC的多寡。结果:合成出检测抗原RAC-BSA。合成得到了荧光微球抗体复合物,该复合物与检测抗原有很好的结合,且与BSA不存在非特异性结合。建立了RAC荧光快速检测方法,制备出了RAC荧光微球免疫层析试纸条,该试纸条检测猪尿中RAC的残留,灵敏度最低值为2ngmL-1,与克伦特罗(CL),沙丁胺醇(SAL)等类似物无交叉反应。结论:本研究建立的莱克多巴胺荧光微球免疫层析快速检测技术操作便捷,稳定可靠,灵敏度高,可作为猪尿中莱克多巴胺残留现场检测和监控的有效手段。
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