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将hBDNF前体基因片段插入到杆状病毒转移载体pBacPAK9中,构建了重组质粒转移载体pBacPAK9BDNF.将纯化的重组质粒pBacPAK9BDNF与经Bsu361酶切的BacPAK6病毒DNA大片段用Lipofectin介导的方法共转 染入sf21细胞,通过细胞内的强力同源重组得到重组杆状病毒,用噬斑分析方法挑选,再用狭逢杂交检测表明外源基因重组入BacPAK6的重组率为100%;用BDNF抗体免疫细胞化学染色方法和免疫印迹分析方法检测经重组病毒株感染72h的sf21细胞,结果显示胞浆有BDNF样强阳性反应,而经空载体BacPAK6病毒感染72h的sf21细胞及非感染细胞均呈阴性反应;重组hBDNF对E8的鸡胚背根节(DRG)有明显的促进神经元突起生长的作用,并可促进生后7天(P7)Wistar大鼠耳蜗初级听觉神经元的体外存活和轴突生长.收集感染复数MOI=8、感染80h原无血清培养上清,用1×5cm-Sepharose CL 6B离子交换柱初步纯化,经SDS-PAGE后用免疫印迹检测,在浓缩后的经初步纯化的样品中显示有15kd左右的BDNF蛋白条带.