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猪瘟（classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的一种高度接触性传染病，几乎遍及全世界（除北美洲和大洋洲外），死亡率高达80％～90％。该病被世界动物卫生组织（OIE）列入OIE疾病名录（OIE Listed diseases），为须申报的（notifiable）动物传染病。抗原表位，又称抗原决定簇，是抗原分子抗原性的基础。正确而详细地绘制抗原表位图谱对疾病的诊断、设计无毒副作用的多表位疫苗以及免疫治疗试剂等具有积极的意义。为深入了解CSFV的抗原结构，便于设计科学合理的疫苗和诊断试剂，我们对CSFV石门株（Shimen株）E2蛋白进行了抗原表位鉴定。本研究首先利用噬菌体随机12肽库对CSFV Shimen株E2蛋白单克隆抗体HQ06进行了3轮筛选，获得一致序列LFDGSNP，与E2蛋白氨基酸序列对比发现，此一致序列与E2蛋白N-端的B／C和A抗原区772LFDGTNP778序列具有很高的同源性。为了进一步验证此基序是否为一表位，将多肽LFDGTNP与GST在原核系统中融合表达，Western blot和ELISA结果显示表达LFDGTNP的融合蛋白可以被HQ06特异性识别，证实772LFDGTNp778确为抗原表位。由以上结果表明，772LFDGTNp778为CSFV Shimen株的一个保守的线性B细胞抗原表位，此表位的鉴定对猪瘟病毒诊断研究具有一定的参考价值。另外，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统分泌表达了CSFV Shimen和CSFV HCLV株的E2蛋白。重组蛋白Shimen-E2和HCLV-E2都是以二聚体的形式分泌表达于细胞培养液中，并且分子量存在差异。重组蛋白Shimen-E2和HCLV-E2均可被猪瘟病毒抗血清和猪瘟E2蛋白单克隆抗体HQ06所识别。定点突变分析表明，Shimen-2和HCLV-E2分子量大小差异是由于在986NYT（A）处糖基化位点的不同所致。用纯化后的重组蛋白Shimen-E2作为免疫原，建立了一株特异性分泌E2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为6E10。此细胞株分泌的单克隆抗体可以特异性识别猪瘟病毒，但与变性的E2蛋白反应很弱，初步推测单克隆抗体6E10可能是针对E2蛋白的构象表位。利用噬菌体随机12肽库对单克隆抗体进行3轮筛选，获得9个噬菌体克隆，与单克隆抗体6E10均发生特异性反应，测序结果显示，噬菌体克隆展示一致序列YWH，但与E2蛋白无同源序列，推测这些克隆为模拟表位。总之，本研究鉴定了猪瘟病毒一个线性B细胞表位772LFDGTNP778，研制了一株CSFV特异性单克隆抗体6E10的杂交瘤细胞系，并对其针对的抗原表位进行了初步的鉴定，为深入了解CSFV E2蛋白结构功能和建立猪瘟病毒诊断方法奠定了基础。