CD44对K562细胞株耐药的影响及其机制

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目的:探讨CD44在K562细胞及阿霉素耐药细胞株K562/ADR中的表达情况,阐明CD44与K562细胞耐药之间的相关性,探索逆转白血病耐药的途径。方法:1.利用实时荧光定量PCR法,检测K562细胞及K562/ADR细胞中CD44的mRNA表达水平;2.用电转染法,制备高表达CD44的K562细胞(K562/CD44细胞);3.用倒置荧光显微镜下观察法、实时荧光定量PCR法,检测K562和K562/CD44细胞的CD44标记绿色荧光蛋白、CD44的mRNA表达水平,确认转染成功与否;4.WST-1细胞增殖实验,检测K562细胞的阿霉素IC50,选择适宜的阿霉素药物浓度和作用时间,并对比K562和K562/CD44细胞在阿霉素相同浓度和相同时间作用下的存活率。结果:1.实时荧光定量PCR检测结果:与K562细胞比较K562/ADR细胞中的CD44 mRNA表达水平显著上升(P<0.01);2.倒置荧光显微镜观察结果显示:CD44高表达载体转染后的细胞具有绿色荧光蛋白的高表达;3.实时荧光定量PCR检测结果:与K562细胞相比较K562/CD44细胞中的CD44 mRNA表达显著上调(P<0.01);4.WST-1 细胞增殖实验检测结果:(1)0.25mg/L、0.5mg/L、1.Omg/L、1.5mg/L和2.0mg/L的阿霉素作用于K562细胞24h、48h、72h均显著抑制细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性,1.0mg/L、1.5mg/L和2.0mg/L的阿霉素抑制细胞增殖效应无显著差异(P>0.05),K562细胞的阿霉素IC50为0.7376mg/L;(2)与K562细胞比较,K562/CD44细胞在1.0mg/L阿霉素作用48h时的存活率显著上升(P<0.01)。结论:1.CD44过表达的K562细胞对阿霉素的敏感性减弱;2.CD44的过表达可能参与了 K562细胞的耐药机制。
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