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目的：在建立大鼠急性创伤性肢体深静脉血栓动物模型基础上，应用Affymetrix基因芯片技术，从基因水平研究血栓形成后，消退与不消退两种不同病理过程间股静脉中差异表达基因，探索影响创伤性肢体深静脉血栓消退的部分关键因素。方法：1．分组：250只SD大鼠（雌雄不限）随机取20只作为对照组，余230只据创伤造模后血栓形成病理变化过程分为：创伤即刻组（B组，造模后0.5小时）、血栓形成前期组（C组，造模后2.5小时）、血栓形成高峰期组（D组，造模后25小时）、血栓消退期组（E组，造模后72小时）、血栓不消退组（F组，造模后72小时）和血栓不形成组（G组，造模后72小时）。2．造模：对照组大鼠不造模，创伤组大鼠造模时不行麻醉，造模方法为：双侧腹股沟区碘伏液消毒后行内侧切口，长约1cm，暴露出股动、静脉及股神经，稍作钝性分离显露长约1.5cm的股静脉，用12.5mm全齿蚊式血管钳分三段各钳夹血管1次（力量为血管钳紧1扣，每次持续3秒）后，用1号丝线全层间断缝合皮肤切口，不放置引流，除对照组、创伤即刻组外大鼠均行双后肢髋人字石膏固定；造模后观察大鼠双足颜色和肿胀情况。3．取材方法：对照组大鼠不造模即取材，创伤即刻组于造模后0.5小时，其余各组大鼠在相应时相点沿原切口暴露股静脉，观察血栓形成状态，符合分组标准后，用3％的戊巴比妥钠溶液按1ml／kg体重，腹腔内注射麻醉，仰卧位固定，碘伏液消毒双后肢前内侧皮肤区域后，沿双侧股静脉走行切开皮肤约4.5cm，观察局部组织反应、股静脉血栓是否形成、严重程度及消退、不消退情况，分别记录；显微镜下分离并切取双侧各长约4.5cm的股静脉及主要属支，留长约0.5cm的血管用甲醛固定，送HE染色组织切片镜检；0.9％生理盐水冲洗干净血管中的血液或血栓，离体30秒内放入冻存管，置入液氮罐中保存，用于总RNA提取。4．总RNA提取：TRIzol法分别提取上述7组股静脉标本总RNA；各组总RNA样品经琼脂糖凝胶电泳检测合格后（28SRNA和18SRNA条带整齐，两者带宽比值超过2倍）分为两份，一份送以进行基因芯片检测，另一份备用以行RT-PCR检测。5．芯片及RT-PCR检测：按Affymetrix RAT 230A表达谱芯片操作流程，经cDNA探针制备、杂交、洗脱、染色、扫描，完成芯片检测；应用RT-PCR技术检测保留的RNA样品中IL-1β、Cinc2表达情况，并与芯片数据作比较。6．数据筛选及分析：通过倍数变化分析方法（两组间同一基因的Signallog2 ratio比较，差值必须≥1或≤-1，常规认为具有差异性），选取血栓消退与不消退组差异表达基因，应用Gene Cluster 3.0分析软件聚类（能更容易地选取共表达的基因组，提示可能具有相似功能），绘制直观曲线图，并行GO功能分类，查询“NCBI”、“CNKI”网站及期刊文献，搜寻相应背景知识资料，结合表达变化规律综合分析。结果：1．250只SD大鼠共死亡5只，其中3只因造模过程中股动脉破裂，出血死亡，造模后25小时内2只死于肺栓塞，其余大鼠均存活；D、E、F、G四组190只大鼠死亡5只，25小时有126只血栓形成，D组取材用去25只，余101只观察至72小时，64只血栓消退，37只血栓不消退；至72小时又有23只发生血栓，36只一直无血栓形成；动物死亡率2％，血栓发生率80.54％，血栓消退率63.37％，血栓不形成率19.46％；HE染色股静脉组织切片镜检证实：大体观察血栓形成状态进行的分组准确可靠。2．各时相点7份标本总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测，28SRNA和18SRNA条带整齐，两者量的比值超过2倍，样品质量好、无降解。3．Affymetrix RAT 230A芯片所能检测的15866个基因中，7389个基因有差异表达，占总数的46.57％，全部时相点均无变化的有8477个，占总数的53.43％；主要涉及促分裂素原活化蛋白激酶、Ca++、黏附斑、刺激神经的配体-受体相互作用、细胞因子-受体相互作用、核糖体、肌动蛋白细胞骨架、Wnt、嘌呤代谢、白细胞经内皮迁移、胰岛素、糖酵解／糖异生等信号通路。4．消退组与对照组比较，Log2 Ratio≥4.0的上调表达基因24个，无功能描述基因14个，有部分GO功能描述基因10个（Top2a、Stk6、Slpi、Olr1、Kdap、Itgam、Il6、Cd8a、Brca1、A2m），主要涉及DNA、蛋白质代谢和炎症反应等生物学过程；Log2 Ratio≤-4.0的下调表达基因9个，无功能描述基因4个，有部分GO功能描述基因5个（Lepr、Gpd3、Atp1b4、Af6、Adh7），主要涉及细胞间信号传递及能量代谢等生物学过程。5．不消退组与对照组比较，Log2 Ratio≥4.0的上调表达基因26个，无功能描述基因16个，有部分GO功能描述基因10个（Slpi、Olr1、Nos2、Mmp9、Kdap、Itgam、Il6、Cxcl2、Cinc2、Cd8a），主要涉及炎症反应与细胞间作用等生物学过程；Log2 Ratio≤-4.0的下调表达基因8个，无功能描述基因6个，有部分GO功能描述基因2个（Gpd3、Cypla1）。6．消退组与不消退组比较，差异表达2倍以上（Signal log2 ratio≥1或≤-1）基因共118个，无功能描述基因70个，有功能描述的基因48个，其中凋亡／肿瘤相关16个，结合相关29个，代谢相关20个，细胞周期相关3个，信号传导相关11个，结构分子活性相关3个，转录调控活性相关3个，运载体活性相关4个。7．股静脉中Mmp-9、Mmp-12、Mmp-13、IL-1、Cxcl2、Cinc2、Ccl3、Ptges、Arg1等基因在血栓消退组与不消退组中表达变化规律较为突出，Mmp-9差异表达甚至达21倍，血栓高峰期组及不消退组中均呈现较高表达，而血栓消退组与血栓不形成组中表达相对较低；与它们共表达的三个未知功能基因，Affymetrix基因芯片探针号为：1391505xat、1379497at、1377365at。8．芯片杂交信号强度满意，各时相点IL-1β、Cinc2的RT-PCR检测结果与芯片结果变化趋势基本一致。结论：1．股静脉可通过表达Mmp-9、Mmp-12、Mmp-13组织修复、血管形成相关基因，IL-1、Cxcl2、Cinc2、Ccl3等炎症相关基因，促进损伤血管修复，发挥抗凝活性，表达Arginase、Ptges等血管扩张、抑制血小板集聚相关基因，共同改变局部血管状态影响血栓消退，其作用在急性创伤性肢体深静脉血栓形成后，是促进还是阻碍血栓消退，还有待于在基因和蛋白水平进行功能性研究进一步证实。2．1391505xat、1379497at、1377365at三个未知功能基因与上述基因呈明显的共表达趋势，推测其功能与组织修复、血管形成、炎症等相关，在血栓消退中发挥重要作用，可进行深入研究。3．钳夹股静脉、髋人字石膏固定双后肢的方法，能成功建立大鼠急性创伤性肢体深静脉血栓模型。4．大鼠急性创伤性肢体深静脉血栓形成，是分裂素原活化蛋白激酶、Ca++、细胞因子-受体相互作用等多种信号传导通路参与的过程。5．大鼠急性创伤性肢体深静脉血栓模型中，血栓消退组与不消退组差异表达基因主要与凋亡或肿瘤（Itga6，Robo1，Alox12，Il1b，Ccl3，Cxcl2，Ptges，Il1a，Mmp-9）、结合（Alox12，Igfbp3，Oprl，Mx2，Mmp12，Il1b，Ccl3，Cinc2，Cxcl2，Il1a，Arg1，Stxbp5，Il13ra2，Mmp-9）、代谢（Alox12，Mx2，Mmp12，Ptges，Arg1，Mmp-9）、细胞循环（Il1b，Il1a）、信号传导（Robo1，Oprl，Il1b，Ccl3，Cinc2，Cxcl2，Il1a，Il13ra2）、结构分子活性（Col11a1）、运载体活性（Kcnj5）等功能相关。6．RT-PCR技术检测IL1、Cinc2表达，结果与芯片结果有较好的一致性，一定程度上验证了Affymetrix基因芯片数据的可靠性。