半边莲多糖的提取纯化工艺及其免疫活性研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lijinjie1981
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  目的:探讨半边莲多糖的提取、纯化工艺,并优化其工艺条件,研究半边莲多糖的免疫活性,为进一步开发半边莲药材奠定基础。   方法:1、以半边莲多糖得率及糖含量为指标,辅以综合加权评分法,分别考察半边莲多糖的水提取工艺、微波提取工艺及超声波提取工艺的各项影响因素,包括料液比、提取温度(功率)、提取时间、提取次数等,并以正交试验确定最佳提取工艺。2、以半边莲多糖脱蛋白(色)率及多糖保留率为指标,辅以综合加权评分法,分别考察半边莲多糖的 H2O2 脱色工艺、脱蛋白工艺、大孔吸附树脂纯化工艺的各项影响因素,包括 H2O2用量、pH、脱蛋白(色)温度、酶解温度、酶解时间、酶用量以及径高比、最大上样量、洗脱流速、洗脱剂用量等因素,并以正交试验确定各自最佳纯化工艺。3、以正常小鼠及免疫低下小鼠的巨噬细胞吞噬指数、吞噬百分率、溶血素、溶血空斑的形成为指标,以香菇多糖混悬液为阳性对照药,生理盐水为空白对照药,考察不同浓度下半边莲多糖溶液对正常小鼠及免疫低下小鼠的机体免疫力的影响。   结果:研究表明1、半边莲多糖常规水提取工艺最佳条件为:以料液比为1:15温度90℃的反应体系下,提取3次,每次1h;微波提取工艺最佳条件为:加药材30倍量水,于560W微波提取3次,每次30min;超声波提取工艺最佳条件为:加药材30倍量水,超声功率400W提取4次,每次30min。2、半边莲多糖H2O2脱色最佳工艺条件为:对10mg/mL的半边莲多糖溶液10mL进行脱色,加入2mL H2O2并调节pH至8,于70℃水浴脱色效果最佳;半边莲多糖脱蛋白纯化最佳工艺条件为:对 10mg/mL 的半边莲多糖溶液 10mL,以酶底比为 1.0%加入木瓜蛋白酶,在温度为40℃pH6.0的反应体系中酶解1.5h脱蛋白效果最佳;大空吸附树脂最佳纯化工艺为:称取D101型树脂25g,选取径高比约为1:8.5湿法装柱,最大上样量为130mL,洗脱流速为0.3mL/min,洗脱剂用量为520mL即可获得最佳纯化效果。3、小鼠的免疫药理研究表明:小剂量半边莲多糖可提高正常小鼠及免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数,并促进溶血素和溶血空斑的形成,具有较好的增强免疫力的作用;而大剂量的半边莲多糖可降低正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数,并抑制溶血素和溶血空斑的形成,具有一定的抑制免疫的作用。   结论:通过一系列的验证试验确定本研究所优化的半边莲多糖提取纯化工艺条件切实稳定可行,经纯化所得半边莲多糖得率为 24.65%,糖含量为 76.28%,药理实验证明半边莲多糖有增强机体免疫力的功效,可用于相关药物及保健品的开发。
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