【摘 要】
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叶际内生和附生环境是微生物的重要栖息地。香柱菌属（Epichlo（?））内生真菌能与其他叶际微生物类群在冷季型禾草中共生。醉马草（Achnatherum inebrians）为禾本科多年生草本植物,与Epichlo（?）属内生真菌形成的互利共生体具有较强的生物和非生物胁迫抗性。本研究以田间生长旺季且无明显病症的、带内生真菌（endophyte-infected,EI）和不带内生真菌（endophy
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叶际内生和附生环境是微生物的重要栖息地。香柱菌属（Epichlo（?））内生真菌能与其他叶际微生物类群在冷季型禾草中共生。醉马草（Achnatherum inebrians）为禾本科多年生草本植物,与Epichlo（?）属内生真菌形成的互利共生体具有较强的生物和非生物胁迫抗性。本研究以田间生长旺季且无明显病症的、带内生真菌（endophyte-infected,EI）和不带内生真菌（endophyte-free,EF）醉马草叶片为试验材料,通过传统的分离培养、Illumina测序技术、液相色谱和质谱联用（LCMS）检测,探究内生真菌对醉马草叶际微生物和叶片代谢物的影响,以及叶际微生物和叶片代谢物之间复杂的相关性。以期进一步揭示内生真菌-叶际微生物-叶片代谢物三者之间的相互驱动关系,为科学合理的利用醉马草资源提供理论基础。所获主要结果如下:（1）通过传统分离培养,从醉马草叶际共获得2180个细菌菌株,序列比对鉴定为4门、22属和47种。EI植株叶际内生细菌的菌落总数显著（P＜0.05）高于EF植株。内生真菌显著（P＜0.05）降低内生细菌群落中假单胞菌属（Pseudomonas）的相对丰度,提高其在附生细菌群落中的相对丰度。内生真菌与叶际环境的互作显著（P＜0.05）影响叶际可培养细菌群落的多样性和丰富度。从醉马草叶际共分离得到256个真菌菌株,序列比对鉴定为2门、18属和24种。子囊菌门（Ascomycota）为主要类群。内生真菌显著（P＜0.05）增加枝孢霉属（Cladosporium）的相对丰度,降低链格孢属（Alternaria）的相对丰度,并提高表面消毒叶片可培养真菌群落的多样性。消毒叶片真菌群落的多样性和丰富度显著（P＜0.05）低于未消毒叶片。冗余分析（redundancy analysis,RDA）发现,叶片p H、有机碳（OC）、全氮（TN）和全磷（TP）含量影响叶际可培养细菌和真菌群落的组成。（2）通过高通量测序,从醉马草叶际共获得892704条细菌序列和1018368条真菌序列。叶际细菌群落的主要类群包括变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、放线菌门（Actinobacteria）和拟杆菌门（Bacteroidetes）。内生真菌提高醉马草叶际细菌群落的多样性和丰富度。叶际内生细菌群落的多样性和丰富度显著（P＜0.05）高于附生细菌群落。在醉马草叶际真菌群落中,最丰富的类群是子囊菌门（Ascomycota）,其次是担子菌门（Basidiomycota）和被孢霉门（Mortierellomycota）。内生真菌提高醉马草叶际真菌群落的多样性。叶际内生真菌群落的丰富度显著（P＜0.05）高于附生真菌群落,但二者的多样性差异不显著。（3）通过LC-MS/MS检测分析,从EI与EF醉马草叶片共检测并注释到414种代谢物,其中包括24类132种差异代谢物。在内生真菌影响下,醉马草叶片的嘌呤衍生物、吲哚衍生物和植物雌激素上调,而脂质-磷脂、鞘脂和酚类等下调。在KEGG（kyoto encyclopedia of genes and genomes）数据库中,共注释到42种差异代谢物,显著（P＜0.05）富集于20条代谢通路中,其中,苯丙氨酸代谢和半乳糖代谢是主要的富集途径。（4）通过斯皮尔曼（Spearman）相关性分析得到醉马草叶际微生物门和叶片代谢物之间的229种显著相关性。其中,61种差异代谢物与9个内生细菌门之间存在115种显著相关性（P＜0.05）,厚壁菌门（Firmicutes）与吲哚乙酸（indoleacetic acid）等正相关,与香草醛（vanilla）等负相关。50种差异代谢物与10个附生细菌门之间存在50种显著（P＜0.05）相关性,放线菌门（Actinobacteria）与肠二醇（enterodiol）等正相关,与苯托品（benztropine）和涕灭威（aldicarb）等负相关。34种差异代谢物与8个内生真菌门之间存在39种显著（P＜0.05）相关性,毛霉门（Mucoromycota）和捕虫霉菌门（Zoopagomycota）与鱼藤素（deguelin（-））正相关,子囊菌门（Ascomycota）与吲哚乙酸负相关。24种差异代谢物与8个附生真菌门之间存在25种显著（P＜0.05）相关性,子囊菌门与尼泊金甲酯（methyl 4-hydroxybenzoate）正相关,担子菌门（Basidiomycota）与尼泊金甲酯负相关。
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