【摘 要】
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肌内脂肪组织（IMAT）是位于肌束之间的脂肪细胞库,一直是脂肪代谢研究的热点之一。畜牧业中降低肉用动物皮下脂肪含量,增加肌内脂肪可以改善肉品质,提高人们的生活质量。研究发现,miRNA在众多生物体生长发育、细胞分化增值及代谢等领域都发挥重要作用,其中miR-140-5p是否在脂肪细胞分化的过程中具有促进或抑制的作用目前鲜少报道。本试验通过研究miR-140-5p对3T3-L1细胞成脂分化的作用,及
【基金项目】
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山西省留学人员科技活动择优资助项目； 国家自然科学基金（31772690）； 山西省优秀人才科技创新项目（201805D211012）； 山西省博士毕业生来晋工作奖励经费科研项目（SXBYKY2022013）；
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肌内脂肪组织（IMAT）是位于肌束之间的脂肪细胞库,一直是脂肪代谢研究的热点之一。畜牧业中降低肉用动物皮下脂肪含量,增加肌内脂肪可以改善肉品质,提高人们的生活质量。研究发现,miRNA在众多生物体生长发育、细胞分化增值及代谢等领域都发挥重要作用,其中miR-140-5p是否在脂肪细胞分化的过程中具有促进或抑制的作用目前鲜少报道。本试验通过研究miR-140-5p对3T3-L1细胞成脂分化的作用,及miR-140-5p与其预测靶基因PCAF、PDGFRα的靶向关系及其在成脂分化中的影响,探究miR-140-5p在脂肪形成中的作用及机制,为畜牧业中寻找不同脂肪代谢类型和调控机制提供理论基础。为精准找到调控靶点,利用基因编辑技术改良肉用畜种提高肉品质提供帮助。本试验研究内容与结果如下:（1）试验通过诱导3T3-L1细胞成脂分化,利用油红O染色、qRT-PCR与Western blotting等方法研究在3T3-L1细胞分化过程中内源性miR-140-5p表达量的变化与外源影响miR-140-5p表达后对3T3-L1细胞分化状态及成脂相关因子表达的变化。结果显示:在3T3-L1细胞分化过程中内源性miR-140-5p的表达增加。在3T3-L1细胞中过表达miR-140-5p可刺激3T3-L1细胞成脂分化,同时促进脂肪生成因子的表达。相反,抑制内源性miR-140-5p可阻断脂肪生成。（2）为研究miR-140-5p对3T3-L1细胞成脂分化影响的具体机制,在miRBase、miRDB等网站中查找miR-140-5p的预测靶基因,从中挑选与脂肪生成相关基因PCAF与PDGFRα,对靶基因进行成脂相关研究以及靶向关系验证。试验通过细胞转染、油红O染色、q RT-PCR、Western blotting和双荧光素酶报告检测等方法得出结果:过表达miR-140-5p后引起PCAF表达升高,相反抑制miR-140-5p表达后PCAF表达量降低;同时过表达PCAF后促进前脂肪细胞3T3-L1成脂分化,脂滴形成显著增多,成脂标志基因C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ均有上调趋势,而敲低PCAF则抑制了成脂标志基因C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ的表达,双荧光素酶报告结果中miR-140-5p mimics与PCAF3’UTR共转染组与对照组相比活性无显著差异,说明miR-140-5p与PCAF没有直接靶标关系。（3）在排除PCAF是miR-140-5p直接靶基因的同时,对miR-140-5p另一个预测靶基因PDGFRα进行成脂相关研究,试验通过细胞转染、油红O染色、q RT-PCR、Western bloting和双荧光素酶报告检测等方法得出结果:在3T3-L1细胞中过表达miR-140-5p降低了PDGFRαm RNA和蛋白的水平,而抑制内源性miR-140-5p增加了PDGFRαm RNA和蛋白的水平。PDGFRα的过表达抑制3T3-L1细胞的脂肪生成且抑制成脂相关因子的表达,而PDGFRα的敲低则促进3T3-L1细胞的成脂分化与成脂相关因子的表达。双荧光素酶报告结果表明PDGFRα是miR-140-5p的直接靶基因。综上表明,miR-140-5p通过靶向PDGFRα从而促进3T3-L1细胞的成脂分化和脂肪生成。miR-140-5p也可以通过介导PCAF促进成脂标志基因表达且促进前脂肪细胞成脂分化为脂滴,但PCAF与miR-140-5p不是直接靶向关系。
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