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目的： 1.了解温州医科大学附属第一医院2003年至2016年间临床分离的肺炎克雷伯菌的临床分布、耐药性及耐药变迁情况，为选择治疗肺炎克雷伯菌引起感染的抗菌药物提供依据。 2.研究临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物的耐药机制及耐药基因的分布情况，为临床耐药株的监控提供依据。 3.研究耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行病学。 方法： 1.回顾性调查2003年至2016年间临床分离肺炎克雷伯菌的标本来源、感染分布和耐药情况，收集2003年至2016年温州医科大学附属第一医院临床标本中分离到的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌，采用Vitek全自动微生物分析系统进行鉴定和药敏试验。 2.应用琼脂稀释法测定2003年至2012年临床分离并保存的866株肺炎克雷伯菌和2013至2016年248株经全自动微生物分析系统检测为碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物美罗培南和亚胺培南的 MIC值，确定对碳青霉烯类耐药的菌株。 3.应用PCR方法检测245株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶耐药基因blaKPC、blaNDM和blaIMP的携带情况。 4.采用多位点序列分型（MLST）方法对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行基因分型，探讨我院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行病学特性。 结果： 1.2291株肺炎克雷伯菌主要分离自痰液（45.3%，1037/2291）、尿液（15.3%，350/2291）和血液（14.2%，325/2291）；其次为脓液（8.1%，186/2291）、引流液（5.2%，118/2291）和创口（4.3%，98/2291）及其它（8%，177/2291）。2291株肺炎克雷伯菌对临床常用的5类抗菌药物的相关耐药分析显示：对碳青霉烯类药物亚胺培南的耐药率自2009年的1.0%开始呈现逐年上升趋势，至2016年已经达到23.9%；对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率相对较低，在15.0%上下波动；而对头孢他啶、庆大霉素和左氧氟沙星等几种药物的耐药率大部分在20.0%到40.0%间波动，没有明显的趋势改变。科室的分布分析显示本次研究的菌株主要来自于ICU病区，为402株（17.5%）、其次为脑外科182株（8.0%）、神经外科104株（4.5%）、创伤烧伤科130株(5.7%)、呼吸科88株(3.8%)、血液透析室40株(1.7%)、产科51株(2.2%)。 2.琼脂稀释法检测碳青霉烯类药（亚胺培南和美罗培南）的MIC值，结果共筛选出245株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）。根据CLSI2016版标准，2006年、2007年、2009年和2012年分别有1株肺炎克雷伯菌（共计4株）因判断折点的改变而被判读为CRKP。 3.根据琼脂稀释法的结果对245株CRKP的耐药变迁进行分析，结果发现我院CRKP的耐药率在2006年到2012年间相对平稳；2013年升高到7.2%，2016年达到22.4%。 4.245株肺炎克雷伯菌中检出单blaKPC阳性菌株232株，检出率为94.7%；单blaIMP基因阳性菌株2株，检出率为0.8%；blaKPC合并blaIMP共2株，检出率为0.8%，所有耐药株均未检出blaNDM基因。9株未携带blaKPC、blaIMP和blaNDM的CRKP中，有3株改良Hodge阳性，5株阴性和1株无法判明。2006年到2012年间blaKPC携带率为37.5%（3/8），2013年到2016年的CRKP以携带blaKPC为主97.9%（232/237），我院第一株产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC）的CRKP出现在2009年。 5.MLST结果显示245株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌共分为22个ST型，包括1株新的序列型（ST2740）。其中ST11217株，占81.6%；其次是ST15型4株；ST656型3株；ST23型2株；ST893型2株。此外ST34、ST35、ST35、ST65、ST268、ST660、ST690、ST692、ST730、ST881、ST895、ST1419、ST1384、ST1224、ST2740、ST1087、ST1832、ST2515各1株。 6.2006年到2016的ST型年度分型结果显示，2006年至2012年8株CRKP中ST11共2株占25%（2/8），其中1株携带blaKPC占50%（1/2）；2013年到2016年共237株CRKP，215株ST11占90.7%（215/237），ST11型中214株携带blaKPC占99.5%（214/215）。 结论： 1.本院分离的肺炎克雷伯菌临床标本类型主要是痰液，其次是血液和尿液；主要分离的病区为ICU。本次研究对临床常用5种抗菌药物的耐药分析显示，肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物耐药菌株自2009年首次被检出，随后呈逐年上升的趋势，并于2016年上升到23.9%；对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率相对较低，在15.0%上下波动；而对头孢他啶、庆大霉素和左氧氟沙星等其他几种药物的耐药率大部分在20.0%到40.0%间波动，没有明显的改变趋势。 2.根据琼脂稀释法检测，共筛选出245株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌。根据碳青霉烯类药物折点改变后的CLSI2016版标准判定，2013年之前共新增了4株CRKP，将我院最早检出CRKP的时间由2009年提前到了2006年。 3.根据琼脂稀释法的结果对245株CRKP的耐药变迁进行分析，结果发现我院CRKP的耐药率在2006年到2012年间相对平稳，自2013年开始逐年升高，整体呈现上升的趋势。 4.本院2006年到2012年间实验菌株的耐药机制相对分散，2013年到2016年CRKP的耐药机制以产KPC为主，我院第一株产KPC的CRKP出现在2006年。耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物敏感性下降的主要原因是产碳青霉烯酶KPC，blaKPC携带率为94.7%（232/245）；其次为产亚胺培南酶（IMP）， blaIMP携带率为0.8%（2/245）；还有2株同时携带blaKPC和blaIMP，携带率为0.8%（2/245）；另有6株耐药机制不明确，尚待进一步研究。 5.研究通过MLST对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌株的流行病学进行分析，本次实验CRKP共分为ST11、ST15、ST23、ST656、ST34、ST35、ST893、ST65、ST268、ST660、ST690、ST692、ST730、ST881、ST895、ST1419、ST1384、ST1224、ST2740、ST1087、ST1832、ST2515等22个ST型，其中ST2740为本次研究新发现的ST型。在2006年到2012年之间，我院检出的CRKP的ST类型相对较分散，2013到2016年间ST11成为我院主要流行的ST型。总体结果表明ST11为我院主要流行的ST型。 6.2006年至2012年间ST型和耐药机制均比较分散。2013年到2016年的ST型主要为ST11型，ST11型CRKP的主要耐药机制为产KPC。