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目的初步探讨超声内镜引导下进行重组人5型腺病毒(安柯瑞)瘤内注射与卡培他滨联用治疗中晚期胰腺癌的疗效和临床安全性。然后,通过建立裸鼠胰腺癌移植瘤动物模型,进一步验证安柯瑞联合卡培他滨的治疗方案对胰腺癌的治疗疗效,初步探究其潜在的抗瘤机制。方法1.纳入10例已经失去手术机会而且未进行任何抗肿瘤治疗的中晚期胰腺癌患者,通过超声内镜引导下安柯瑞胰腺肿瘤瘤内注射,治疗后第3天开始口服卡培他滨化疗(1250mg/m~2,每天2次,连续14天,停7天,每21天为1个疗程)。观察计算治疗前后瘤体的体积、肿瘤的弹性系数、血清肿瘤标志物、Karnofsky评分、疼痛评分、患者生存期、治疗不良反应和并发症。2.利用Western Blot方法检验胰腺癌Bxpc3细胞株p53蛋白表达类型,通过瘤块皮下包埋方法构建裸鼠皮下移植瘤动物模型。观察各组裸鼠的一般状况,肿瘤的生长情况,描绘肿瘤瘤体生长曲线,并计算抑瘤率。HE染色观察比较各组肿瘤组织形态变化。免疫组织化学法检测各组瘤体组织中野生型p53蛋白、ki67蛋白表达情况。应用细胞原位末端标记法(TUNEL)检测各组细胞凋亡情况。Elisa方法检测肿瘤组织研磨上清液中的IL-1β、IL-18、IL-10水平。电镜观察各组细胞超微结构。结果1.根据RECIST1.1标准,10例胰腺癌患者治疗后3周,1例患者获得PR,8例患者为SD,1例患者为PD,无CR患者。其中8例获得SD的患者中,有5例在治疗后6周瘤体内出现了液化坏死改变;患者治疗后6周的瘤体原发灶的弹性系数与治疗前相比较,差异有统计学意义(P<0.05);患者疼痛评分从治疗前5.50(4.00~7.00)分降至治疗后3周0.00(0.00~2.00)分,Karnofsky评分从治疗前(64.00±12.65)分升至治疗后3周(90.00±14.14)分,两者分别与治疗前相比较,差异均有统计学意义(P<0.01);治疗后3周、6周、9周胰腺癌患者的胰腺瘤体体积、血清CEA、CA199浓度分别与治疗前相比,差异均无统计学意义(P>0.05);10例胰腺癌患者随访(8.5±6.1)个月,随访截止时存活1例,存活最短2个月,最长22个月。中位生存期为7个月,中位无进展生存期为4个月;治疗后1例出现轻微流感样症状,3例出现低热,1例出现高热。1例出现轻度高淀粉酶血症,其余病例未出现不良反应及操作相关并发症。2.Western Blot结果显示人胰腺癌细胞株Bxpc3表达突变型p53蛋白;联合组治疗后裸鼠瘤体的生长速度比化疗组、对照组明显减缓(P<0.05)。联合组治疗后1、2周、病毒组治疗后1周的瘤体体积均较治疗前略缩小(P>0.05);联合组抑瘤率为47.7%,病毒组为40.7%,化疗组为21.0%,联合组、病毒组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);联合组HE染色可见大片坏死性病灶,淋巴细胞聚集在坏死区边缘。病毒组坏死区域被肿瘤组织包绕,内见大量炎性细胞浸润。化疗组可见少量局灶性坏死区域。对照组以实体肿瘤组织为主;光镜下联合组野生型p53蛋白阳性细胞、对照组ki67蛋白阳性细胞分布较广,四组组间差异有统计学意义(P<0.05);联合组凋亡细胞比例高于其余三组(P<0.01);联合组IL-18、IL-1β水平高于其余三组,IL-10水平降低(P<0.05);电镜下观察病毒注射的两组胰腺癌细胞膜结构破裂,细胞器固缩、结构消失,细胞核固缩,核染色质凝聚、边集,胞内见膜性空泡状结构和自噬现象。结论1.超声内镜引导下安柯瑞瘤内注射与卡培他滨联用,能够缓解中晚期胰腺癌患者的癌性疼痛、改善患者的生存质量和延长其生存期,该治疗方案是安全有效的。2.动物实验结果表明安柯瑞与卡培他滨的联合治疗方案比单药治疗更有优势,可缩小肿瘤体积,抑制肿瘤生长,提高瘤体组织中野生型p53蛋白的表达,并诱导细胞凋亡和细胞焦亡的发生。