SCAP外泌体调控Cdc42转录驱动血管内皮细胞迁移的机制研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yinxiaomei
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:在受损组织的修复与再生过程中,快速且充足的血管供应为组织提供氧气、营养物质以满足局部代谢需求。外泌体作为间充质干细胞旁分泌的重要物质,在促进血管生成和组织再生中发挥重要作用。血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)不断增殖,迁移并排列成管状结构是血管生成的初始过程。其中,细胞迁移是影响血管生成过程中管腔形成的重要因素,也是新生血管生成的基础。细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,Cdc42)调控丝状伪足形成,调节细胞骨架重组从而促进细胞迁移。芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)是一种重要的受胞内配体激活的转录因子,在肿瘤组织细胞的增殖、凋亡、黏附和迁移等生物学行为中发挥重要调控作用,应用PROMO、LASAGNA和JASPAR数据库分析AhR可能是调节Cdc42的转录因子。本研究旨在探讨根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)来源的外泌体(exosomes derived from SCAP,SCAP-Exo)调控Cdc42转录介导VECs迁移的作用机制。研究方法:1.酶消化法分离提取SCAP,成脂、成骨诱导检测其多向分化能力,流式细胞术检测间充质干细胞表面标记物。超高速离心法提取SCAP-Exo,透射电镜观察其形态特征,纳米颗粒示踪技术分析粒径,Western blot检测外泌体特异性蛋白Alix、CD9和细胞内质网特异性蛋白Calnexin的表达。2.沉默VECs中的Cdc42,应用SCAP-Exo处理VECs,q RT-PCR检测SCAP-Exo处理后Cdc42的m RNA表达水平,Western blot和Pull-Down实验检测Cdc42的蛋白和活化水平;划痕实验和Transwell迁移实验检测SCAP-Exo对VECs迁移能力的影响;F-actin免疫荧光染色观察VECs细胞骨架的变化。3.应用SCAP-Exo处理VECs,Western blot检测VECs内AhR总蛋白及核浆蛋白表达水平,免疫荧光检测AhR的核浆分布水平。4.应用AhR核转位的特异性抑制剂CH-223191处理VECs,加入SCAP-Exo,q RT-PCR、Western blot实验检测VECs内Cdc42的基因和蛋白表达水平。实验数据采用SPSS 22.0软件进行统计学分析,两样本间均数比较采用t检验,P<0.05为统计学上有显著性差异。结果:1.SCAP呈梭形,具有成骨和成脂分化能力;SCAP阳性表达间充质干细胞表面标记物CD73、CD90、CD105,不表达造血干细胞表面标记物CD31、CD34、CD45。透射电镜观察SCAP-Exo呈椭圆形双层膜杯状结构,粒径大小在30-150 nm之间,Western blot显示SCAP-Exo阳性表达Alix和CD9,不表达Calnexin。2.SCAP-Exo能够上调VECs中Cdc42的基因和蛋白表达水平,沉默VECs内Cdc42后加入SCAP-Exo能够恢复被抑制的Cdc42表达水平。SCAP-Exo能够通过升高VECs内Cdc42表达提高VECs迁移能力,且丝状伪足形成数量增多(P<0.05)。3.SCAP-Exo对VECs内总AhR蛋白表达无影响,而下调细胞浆中AhR表达水平,上调细胞核中AhR表达水平;免疫荧光结果显示SCAP-Exo能够促进VECs内AhR转位至细胞核中聚集(P<0.05)。4.CH-223191显著抑制了VECs细胞核中AhR的表达水平,VECs内Cdc42的基因和蛋白表达水平显著下调,SCAP-Exo中加入CH-223191后Cdc42的基因和蛋白表达水平下调(P<0.01)。结论:SCAP-Exo可能通过激活VECs内AhR入核,促进Cdc42转录,进而上调Cdc42的蛋白表达水平,调控VECs的细胞骨架重组,促进丝状伪足的形成,从而增强VECs的迁移能力。
其他文献
目的:3D打印钛合金凭借其优异的理化性能及生物相容性被用作骨组织植入物来修复颌骨缺损。铜元素凭借其优异的抗菌活性和生物作用,近年来得到了广泛的关注。早期植入物失败的原因主要是炎症反应,巨噬细胞参与了整个炎症发展的过程。本文通过评估酸洗3D打印含铜钛合金对巨噬细胞生物学行为的影响,探讨此种种植体材料的生物相容性以及为后期临床上使用此种植入物提供参考。研究方法:本研究首先通过3D打印技术和酸洗技术成功
学位
报纸
人工智能等新技术嵌入公共治理实践,在提升治理效率的同时,也带来了治理挑战。科技企业通过公私合作实现从商业主体到“算法影子官僚”的转变,带来了商业利益凌驾于公共利益之上、算法权力侵蚀公权力和政企双方责任归属模糊等风险。“算法影子官僚”的逐利偏向与政府部门面临的公共问责冲突的生成,主要是源于双层委托代理的目标冲突、“算法影子官僚”的“经济人”属性、技术依赖与政府俘获以及政民双方重视不足等因素。基于此,
期刊
目的:牙周病属于慢性炎症性疾病的一种,口腔菌群失调是其主要的致病因素。研究已经证明牙周病是多种消化系统疾病的危险因素。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)是牙周病的主要致病菌,被认为与消化系统疾病的发生和发展密切相关。文献证实长期灌饲P.gingivalis,小鼠的肠道稳态被打破,肠道菌群失调,促炎因子表达升高,紧密连接相关蛋白表达下降。然而
学位
目的:比较传统冲洗器冲洗,超声冲洗,声波冲洗,激光冲洗4种冲洗方法在离体牙C形根管中的渗透能力,为临床治疗提供一定的参考依据。材料与方法:将32颗具有C形根管的离体牙随机分为4组(n=8),Reciproc Blue结合1%Na Cl O和17%EDTA,将根管预备至40号0.06锥度。分别使用30-G冲洗器(冲洗器)、Irrisafe(超声)、EDDY(声波)、PIPS(激光)配合1%Na Cl
学位
目的:探索全牙列弹性(牙合)垫在基础治疗阶段,对于Ⅲ期/Ⅳ期牙周炎患者松动后牙的治疗效果。研究方法:经过伦理审批和受试者签署知情同意后,本研究选取2021年2月至2022年2月在中国医科大学附属口腔医院牙周科门诊就诊的牙周炎患者,最终收集对照组109颗患牙,上颌54颗,下颌55颗,来源于12位患者,其中男性3人,女性9人;弹性(牙合)垫组110颗患牙,上颌64颗,下颌46颗,来源于12位患者,其中
学位
目的:磨牙症患者颞下颌关节紊乱病(TMD)的发生可能与后牙渐进性咬合紊乱相关。本研究通过观察单侧后牙垂直向高度渐进性降低的大鼠髁突改变,探究后牙渐进性咬合紊乱对髁突的影响,为磨牙症患者TMD的临床治疗提供启示。方法:8周龄雄性SD大鼠40只,随机分为4组(每组10只)。实验组均于实验第0天、第8天和第15天调磨左上后牙的临床牙冠0.3~0.4mm,一共调磨三次,牙冠总体高度降低约0.9~1.2mm
学位
目的:建立无牙颌下颌骨、种植体及多基基台、全牙弓式及分段式上部结构的三维有限元模型,综合对比各修复设计的应力分布特点,从生物力学的角度评估和解释下颌正中弯曲及下颌无牙颌种植固定修复体不同设计方式对修复体各部件所受应力的影响,以期为临床设计无牙颌种植固定义齿提供参考。研究方法:选择中国医科大学附属口腔医院口腔种植科1例下颌骨健康、牙列完整的患者,采用锥形束CT扫描患者颌面部资料。使用Mimics、G
学位
目的:牙周炎是由多种牙周致病菌入侵引发的,累及牙周支持组织的慢性炎症性疾病。其中,牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g.)被视为牙周炎的最主要致病菌之一。P.g.的细胞壁脂多糖(lipopolysaccharides,P.g.LPS)作为导致牙周炎的重要的病原体成分。研究表明Drp1介导的线粒体动力学在炎症性疾病的发生发展中起重要作用,但其深层机制尚未明了。本研
学位
目的:牙齿缺失破坏牙列结构和功能的完整性,是一种严重影响人类生活质量的常见口腔疾病。现有的义齿修复治疗方案尽管已经取得了令人满意的效果,但仍不能完全模拟天然牙的生理功能。生理性的牙齿再生旨在通过仿生调控时空特异性表达的信号分子进而实现牙齿组织的功能性再生,这使人类拥有“第三副牙列”成为可能。然而,再生形态和功能良好的牙齿必需阐明精确调控牙齿发育的基因表达模式,其中,微小RNA(micro RNA,
学位