论文部分内容阅读
目的：探讨在非接触共培养条件下,由衰老髓核细胞(NPCs)微环境诱导的骨髓间充质干细胞(MSCs)的过早衰老过程中沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的表达变化及意义。方法：分离培养鉴定大鼠骨髓MSCs及NPCs,在Transwell、室中建立非接触共培养体系,实验分A组单独培养MSCs、B组MSCs与正常NPCs及C组MSCs与衰老NPCs, C组NPCs行衰老诱导；同时对每组设置3d、6d、9d时间点进行检测。比色法、实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-RT-PCR)、Western blot法对各组培养MSCs不同时间点的SIRT1酶活性、mRNA转录水平及蛋白含量变化进行检测。培养9d检测p53蛋白含量、衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性及过氧化物歧化酶1(SOD1)含量评价细胞衰老及氧化应激水平。结果：成功分离并培养大鼠MSCs和NPCs; MSCs鉴定CD29、CD34、CD45、CD90表达率分别为95.0%、0.282%、2.29%、97.8%；NPCs阳性表达Ⅱ型胶原和蛋白聚糖。共培养后酶活性检测显示C组3d的SIRT1酶活性显著高于A、B组(P<0.05),随后减低,至第9d低于A、B两组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。RQ-RT-PCR结果显示C组3d、6d的SIRT1 mRNA表达上调(1.39±0.08,1.82±0.10)较A组(1.00±0.01,1.00±0.02)与B组(0.96±0.05,1.03±0.07)差异有统计学意义(P<0.05)；C组9d表达下调(0.74±0.11)显著低于A、B组(1.00±0.01,1.07±0.10)(P<0.05)。Western blot结果示,较A、B组SIRT1蛋白表达水平,C组SIRT1蛋白表达随时间延长而逐渐降低,比较差异有统计学意义(P<0.05)。共培养第9d,C组p53及SOD1蛋白表达显著高于A、B组(P<0.05)；A、B、C组SA-β-gal阳性细胞率分别为(5.6%±1.4%)、(12.1%±3.6%)和(37.4%±6.1%),3组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：本共培养实验中SIRT1酶活性、mRNA及其蛋白的异常表达,与衰老NPCs微环境诱导的MSCs过早衰老存在相关性。