爪哇根结线虫食道腺两个基因的克隆及发育表达研究

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本文以爪哇根结线虫为材料,对本实验室已经筛选获得的爪哇根结线虫食道腺内具有完整3’端的EST序列进行全长克隆并研究其表达情况,同时,对Mj-eng--3在不同龄期的线虫体内的表达情况及在线虫体内的组织定位进行了研究。主要结果如下: 1.在国内首次利用5’末端保守的反式剪接序列SLl成功获得一个全长为573bp的爪哇根结线虫食道腺内EST全长序列,命名为Mj-l-1。Mj-l-1基因编码149个氨基酸。5’非翻译区(untranslated regions,UTRs)含有一个反式剪接引导序列SLl,3’末端的非转录区多达97bp。通过BLASTX比对,发现该蛋白与胞囊线虫食道腺内的分泌蛋白有30%同源性。该基因可能为新的食道腺假定寄生相关基因。 2.利用半定量RT-PCR技术,对Mj-l-1基因在爪哇根结线虫的侵染前二龄幼虫,成熟雌虫和卵内的表达丰度进行分析。结果表明,Mj-l-1基因在线虫的各个龄期均有表达。在成熟雌虫体内表达最多,卵次之,侵染前二龄幼虫最弱。这暗示了这种基因可能参与线虫的取食、营养、繁殖,以及线虫和寄主的细胞分裂分化起到重要作用。 3.利用半定量RT-PCR技术,首次对Mj-eng-3基因在爪哇根结线虫的侵染前二龄幼虫,成熟雌虫和卵内的表达丰度进行分析。结果表明,Mj-eng-3基因在线虫的各个龄期均有表达。在侵染前二龄幼虫体内表达最多,成熟雌虫次之,卵最弱。推测该基因可能在线虫侵染寄主阶段起到降解寄主细胞壁,诱导巨型细胞形成的重要作用。 4.利用原位杂交技术首次对Mj-eng-3基因进行组织定位,结果表明该基因表达于爪哇根结线虫的亚腹食道腺上。证明该基因主要在线虫侵入寄主前期大量表达。
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