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【研究背景和目的】胃癌是全球最常见的消化道恶性肿瘤之一,其发病率、死亡率及复发率均比较高。目前,胃癌的病因尚未明确,早期无明显症状,易发生远处转移,这些因素导致其预后很差且病死率居高不下。因此,探明胃癌发生发展及转移的机制,寻找有效的预防和治疗措施,是目前研究胃癌的重要内容。在micro RNA表达谱的前期研究中,我们发现mi R-192-5p在胃癌患者的胃组织中表达较正常对照高,本课题通过表达抑制或过表达mi R-192-5p,观察其对胃癌细胞生物学行为的影响,同时探索相关的分子机制,为胃癌的诊断和治疗提供相关的理论依据。【方法】1.q PCR(Quantitative PCR)检测人胃癌细胞株AGS、BGC-823、KATO-III、MGC-803、SGC-7901及胃上皮细胞株GES-1中mi R-192-5p的表达水平。2.基因重组技术构建LV3(H1/GFP&Puro)-hsa-mi R-192-5p inhibitor慢病毒载体,并将其转入胃癌细胞株AGS、SGC-7901,构建敲降mi R-192-5p的稳定细胞株。3.药物筛选敲降mi R-192-5p的稳定细胞株,mi R-192-5p mimic瞬转胃癌细胞株AGS、SGC-7901。CCK-8试剂盒检测细胞的生长、增殖;Transwell法检测细胞的迁移情况。4.靶基因软件(Pic Tar和mi RTarbase)预测mi R-192-5p的靶分子,BCL2可能是mi R-192-5p作用的一个靶分子。双荧光素酶报告基因检测BCL2是否是mi R-192-5p的靶分子。提取敲降mi R-192-5p的胃癌细胞株总蛋白,Western blot检测BCL2的表达水平。【结果】1.胃癌细胞AGS、BGC-823、KATO-Ⅲ、MGC-803、SGC-7901中mi R-192-5p的表达水平也较正常胃上皮细胞GES-1升高,但在AGS、SGC-7901中升高的程度更加明显。2.LV3(H1/GFP&Puro)-hsa-mi R-192-5p inhibitor慢病毒载体构建成功,慢病毒及对照慢病毒成功感染AGS、SGC-7901细胞,获得稳定敲降mi R-192-5p的单克隆细胞株。3.mi R-192-5p敲降后,细胞增殖率较阴性对照组升高,而过表达mi R-192-5p mimic后细胞增殖明显受到抑制。敲降mi R-192-5p后,细胞迁移能力较阴性对照组升高。4.双荧光素酶报告基因结果显示,BCL2是mi R-192-5p的靶分子。敲降mi R-192-5p的胃癌细胞AGS和SGC-7901中BCL2蛋白的表达量显著增加。【结论】mi R-192-5p在胃癌细胞AGS、BGC-823、KATO-Ⅲ、MGC-803、SGC-7901中显著高于正常胃上皮细胞GES-1。敲降mi R-192-5p促进胃癌细胞的增殖和迁移;而过表达mi R-192-5p则抑制胃癌细胞的增殖。mi R-192-5p可能是通过作用于靶基因BCL2信号通路调控胃癌细胞的增殖及迁移。