【摘 要】
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药用植物苍耳根、茎、叶、种皮等组织表面被有腺毛,腺毛是合成药用活性成分萜类的主要部位,特别是倍半萜内酯类化合物,例如苍耳素和苍耳亭。MicroRNAs(miRNAs)是一类长约21-24个核
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药用植物苍耳根、茎、叶、种皮等组织表面被有腺毛,腺毛是合成药用活性成分萜类的主要部位,特别是倍半萜内酯类化合物,例如苍耳素和苍耳亭。MicroRNAs(miRNAs)是一类长约21-24个核苷酸的非编码小分子RNA,一般在转录后水平调控基因表达,据报道,大多数miRNA都与植物的生长发育相关,但是有关miRNA参与到植物次生代谢物质合成过程的文献却鲜见报道。本论文在本实验室已建立的苍耳转录组数据库的基础上,利用高通量小RNA测序技术,结合靶基因功能预测,以期找到在腺毛中与调控萜类化合物生物合成相关的miRNA,进而为阐释萜类化合物合成调控机制提供分子基础。主要研究结果如下: 1)通过HiSeq高通量深度测序,从苍耳叶和腺毛小RNA文库中分别得到12,325,132和9,076,601条原始序列,对原始数据进行去除接头、低质量序列及污染序列处理后,分别获得12,152,212(99.64%)和8,988,274(99.63%)条干净序列。长度统计分析表明,两个样本小RNA长度主要分布在19-25 nt,均以24 nt为主要形式。 2)通过与miRNA数据库(miRBase)收录的所有植物成熟miRNA及其前体序列进行比对,共鉴定出1185个保守miRNA家族和37个新miRNA。对叶和腺毛中miRNA进行表达量分析,共发现494个差异表达的保守miRNA和18个差异表达的新miRNA。 3)对差异表达miRNA进行靶基因预测、靶基因GO富集分析和KEGG通路分析,发现了一些参与到萜类生物合成路径中的靶基因,例如miR7539的靶基因1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS),miR5021和miR1134的靶基因3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)、IPP/DMAPP合酶和IPP异构酶,都被报道是萜类骨架合成过程中的关键基因。 4)随机选择13个差异表达的miRNA,进行了荧光定量PCR实验验证,除miR1134外,其他的实验结果均与测序数据库相符,说明本论文分析得到的数据客观可靠。 本论文首次对苍耳中miRNA进行研究,共找到512个差异表达的miRNA,发现了一些调控萜类化合物生物合成的miRNA,特别是倍半萜类化合物,为解析萜类化合物合成调控机制提供了一定的理论基础。
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