游离血红蛋白(Free Hemoglobin,FHb)是指游离于血浆中的血红蛋白。通常血浆中含有极少量的游离血红蛋白,以与结合珠蛋白相结合的状态存在。当病理状态下,浓度升高的游离血红蛋白超过结合珠蛋白结合能力时,可从肾脏排出,发生血红蛋白尿。游离血红蛋白对动物机体的生理功能和各主要脏器造成的影响以及战伤导致大量失血状况下,机体对输注含有不同浓度FHb血液的耐受程度目前尚未不清楚,本研究在建立猪失血性休克的基础上,拟通过输注不同浓度游离血红蛋白后与对照组对比,动态观察生命体征变化及心、肝、脾、肺、肾、胃肠黏膜功能、病理变化,来了解FHb对动物机体的生理功能和各主要脏器造成的影响,明确其量效关系。第一部分目的:制备游离血红蛋白,建立猪失血性休克模型。方法:制备游离血红蛋白:取健康家猪颈动脉抗凝血100ml,离心、清洗3次得压积红细胞。加入双蒸水,漩涡振荡及超声破碎30min,离心留取上清,自动生化检测仪检测FHb浓度,置-20℃储存备用。②建立休克模型:15头猪随机分为失血性休克组(组H,n=9);正常对照组(组N,n=6)。失血性休克组:采用改良Wigger’s法,30min使平均动脉压(MAP)降至50±5mmHg或放血前50%左右,维持1.5-2h,然后回输60%所失血液和两倍平衡液复苏。正常对照组:只进行麻醉和手术操作,不予放血、再灌注。根据呼吸频率、血压、心率、心输出量以及总胆红素、ALT、AST、Cr、BUN等主要脏器功能指标的变化判断休克的发生。48小时后处死存活动物,观察主要脏器的病理改变。结果:N组动物操作前后心率、呼吸、血压无明显变化(P>0.05);H组放血后心率、呼吸、血压与放血前比较有明显差异(P<0.01),与N组比较亦有明显差异(P<0.01)。病理学检查主要脏器呈现以炎症为主的改变。结论:该法制备游离血红蛋白纯度高,易于操作;失血性休克模型相对稳定,重复性好,易于控制,是一种较理想的失血性休克模型。第二部分目的:了解生理状态及失血性休克时,不同剂量FHb对机体的影响。方法:①生理状态:健康家猪30头,随机分为5组,经静脉途径分别给予不同剂量FHb(0、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg),监测动物生命体征以及血流动力学变化;定时抽取动脉血进行血气分析;检测总胆红素、ALT、AST、Cr、BUN等主要脏器功能指标②失血性休克:健康家猪24头,随机分为4组,按第一部分方法复制失血性休克,复苏过程中经静脉途径给予不同剂量FHb(0、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg),余方法同正常组。结果:正常组动物在输注FHb25mg/kg后各重要脏器变化与正常对照组比较有统计学差异(P <0.05)。而失血性休克组动物在输注FHb10mg/kg后部分脏器变化与休克对照组比较有统计学差异(P <0.05),在输注FHb15mg/kg后各重要脏器变化与休克对照组比较差异显著(P <0.01)。结论:生理状态下,动物对于游离血红蛋白的耐受剂量在20mg/kg至25mg/kg之间,输注低于20mg/kg剂量对于正常动物的生理功能影响不大。失血性休克下,动物对于游离血红蛋白的耐受剂量在10mg/kg左右,低于10mg/kg剂量对于动物在失血性休克情况下是相对安全的。第三部分目的:失血性休克组动物主要脏器的病理学分析。方法:健康家猪30头,按第一部分方法复制失血性休克,复苏过程中经静脉途径给予不同剂量FHb(0、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg),观察48小时后,处死动物,收集各组动物心、肝、脾、肺、肾、小肠黏膜组织,进行HE染色,观察各脏器标本病理变化。结果:单纯休克组的标本于镜下可见各脏器组织结构基本正常,可见轻微的炎性细胞浸润、组织出血、水肿等现象;输注血红蛋白5mg/kg组的各脏器病理损伤情况与休克组相比有统计学差异;输注10mg/kg血红蛋白后,组织内可见严重的病理损伤,可见部分组织大量出血、水肿、细胞变性,部分组织内含血红素。各脏器病理改变与休克组相比差异显著。输注15mg/kg血红蛋白后,组织内可见更为严重的病理损伤,各脏器病理改变与休克组相比差异显著。结论:FHb可加重失血性休克对机体各脏器的损害作用。随着血红蛋白浓度升高,其对组织的影响越明显。