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第一部分人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的鉴定目的:探讨人白血病细胞系KG-1a中是否存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。方法:瑞氏染色和吖啶橙染色分别观察白血病细胞系KG-1a细胞形态和RNA含量;流式细胞术检测细胞周期分布;免疫组化和流式细胞术检测KG-1a细胞CD34抗原的表达;流式细胞术检测CD34~+CD38~-亚群细胞;烟酸己可碱Hoechst33342染色后用荧光显微镜观察KG-1a细胞中侧群(side population, SP)样细胞所占比例。结果:白血病细胞系KG-1a细胞形态原始核仁易见;部分细胞RNA含量低,细胞处于G0/G1期的比例占15.5%。绝大多数细胞的胞浆和胞膜皆表达CD34抗原,KG-1a中CD34+细胞占96.3%,CD34~+CD38~-亚群细胞占7.02%;SP样细胞比例为7.60%。结论:人白血病细胞系KG-1a中存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。第二部分5-FU富集人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞目的:探讨利用细胞周期特异性药物5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil, 5-FU)从人白血病细胞系KG-1a中富集肿瘤干细胞样亚群细胞。方法:体外药物敏感试验确定5-FU的最佳作用浓度和作用时间;KG-1a细胞经5-FU药物处理后,流式细胞术检测存活细胞群中CD34~+CD38~-亚群细胞比例;吖啶橙染色观察细胞内的核酸组成;RT-PCR半定量检测细胞内三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2, ABCG2 )mRNA的表达;烟酸己可碱Hoechst33342染色后用荧光显微镜观察KG-1a细胞中侧群(side population, SP)样细胞所占比例;半固体培养观察细胞的集落形成能力。结果: 50μg/ml 5-FU作用KG-1a细胞4 d后,CD34~+CD38~-亚群细胞比例提高10倍以上;吖啶橙染色可见大部分细胞核酸以发出绿色荧光的DNA为主,RNA含量低;此类细胞高表达ABCG2 mRNA水平;SP样细胞在存活细胞亚群中得到显著富集;而药物处理后细胞集落形成数量较未处理细胞明显减少。结论:利用5-FU能够杀死增殖期细胞的性质,成功建立体外药物筛选富集人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的方法。