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目的:明确EB病毒相关胃癌(EBV-associated gastric carcinoma,EBVa GC)细胞系及组织中微管相关蛋白9(Microtube-associated protein 9,MAP9)的表达情况,探究MAP9表达差异产生的原因以及EBV编码潜伏基因对MAP9基因转录表达的影响,探讨在EBV相关胃癌的发生发展中EBV与MAP9基因的相互作用,为阐明MAP9基因在EBVaGC发生中的作用提供实验依据。方法:采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测EBV阳性胃癌细胞系(GT38、GT39、SNU719)及EBV阴性胃癌细胞系(AGS、BGC823、SGC7901)中MAP9、Polo样激酶(Polo-like kinase 1,PLK1)以及有丝分裂激酶Aurora A(mitotic kinases Aurora A,AURKA)基因的转录表达;基于焦亚硫酸氢盐修饰的基因组测序法(Bisulfite genomic sequencing,BGS)用于检测EBV阳性胃癌细胞系及EBV阴性胃癌细胞系中MAP9基因启动子区甲基化情况;采用Western blotting方法检测EBV阳性胃癌细胞系及EBV阴性胃癌细胞系中MAP9的表达情况,采用免疫组化方法检测EBVa GC及EBVn GC组织中MAP9的表达情况。采用质粒转染方法建立LMP2A(latent membrane protein 2A)和EBER1(EBV-encoded RNA1)过表达EBV阴性胃癌细胞系模型,检测LMP2A和EBER1过表达对MAP9表达的影响。采用t检验与Fisher精确检验进行统计学分析。结果:(1)EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系中MAP9基因转录水平分别为0.66±0.39和0.00±0.00,统计学分析表明,EBV阳性胃癌细胞系MAP9基因转录水平明显高于EBV阴性胃癌细胞系(t=5.831,P<0.0001);EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系中MAP9蛋白水平分别为0.54±0.38和0.18±0.19,统计学分析结果显示,EBV阳性胃癌细胞系MAP9基因蛋白水平明显高于EBV阴性胃癌细胞系(t=3.430,P=0.0265);EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系中PLK1基因转录水平分别为0.54±0.50和0.18±0.13,统计学分析表明,EBV阳性胃癌细胞系与EBV阴性胃癌细胞系中PLK1基因转录水平无明显差异(t=1.219,P=0.2897);EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系中AURKA基因的转录水平分别为6.26±4.26和1.83±0.85,统计学分析EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系中AURKA基因的转录水平无明显差异(t=1.766,P=0.1522)。(2)EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系中MAP9基因启动子区甲基化水平分别为0.40%±0.46%、80.00%±15.39%,统计学分析结果显示,EBV阳性胃癌细胞系中MAP9基因启动子区甲基化水平明显低于EBV阴性胃癌细胞系(t=8.957,P=0.0009)。(3)21例EBVn GC组织中MAP9蛋白呈阳性的为12例,16例EBVa GC组织中MAP9蛋白呈阳性的为8例,统计学分析表明,EBVn GC组织与EBVa GC组织中MAP9蛋白阳性率无明显差异(P=0.746)。(4)外源性LMP2A及EBER1转入EBV阴性胃癌细胞系SGC7901后,与转入前相比较,MAP9的转录水平均为0.00,差异不具有统计学意义。结论:(1)EBV阳性胃癌细胞系中MAP9基因的转录水平及蛋白水平明显高于EBV阴性胃癌细胞系,提示EBV感染可调控MAP9基因的表达,进而影响癌细胞的增殖。(2)EBV阳性胃癌和EBV阴性胃癌细胞系中MPA9基因启动子区甲基化状态不同,提示EBV感染可导致MAP9基因启动子区甲基化状态发生改变,MAP9基因启动子区高甲基化是MAP9基因转录水平下降的原因之一。(3)EBVa GC组织与EBVn GC组织中MAP9蛋白的阳性率无明显差异,提示在胃癌组织中MAP9表达可能还存在其他更加复杂的调控途径。(4)EBV两种潜伏期基因LMP2A和EBER1对MAP9的表达均无明显调控作用,提示LMP2A和EBER1不参与MAP9基因表达的调控。