论文部分内容阅读
黄瓜是设施蔬菜中受到连作影响最重的蔬菜,连作导致了黄瓜根结线虫、枯萎病等病害的加重。淡紫拟青霉是重要的生防菌,可有效防治黄瓜根结线虫,抑制导致黄瓜枯萎病的尖孢镰刀菌。秸秆反应堆技术应用在温室作物的种植中,可以改善土壤中微生态环境,使其朝着有利于作物生长的方向发展。但目前对秸秆反应堆中生防菌种群变化以及与病原物之间的互作关系还缺乏深入研究。本研究明确了秸秆反应堆技术对生防菌(淡紫拟青霉)与病原物(根结线虫和尖孢镰刀菌)之间互作关系的影响,为生防菌的生态调控机理研究和生防效果的评价提供理论依据。本研究的主要结果如下：1、通过RAPD技术设计了淡紫拟青霉特异性引物。采用随机引物对YES-2-14以及近缘菌株的基因组DNA多态性进行分析,扩增到仅出现于淡紫拟青霉基因图谱中的特异性条带(大小为203bp)。根据YES-2-14的RAPD标记中核苷酸序列设计引物并用于菌株特异性条带的筛选,从中挑选出1对特异性最好的引物转化为SCAR引物,扩增产物大小为195bp。通过PCR进一步验证SCAR引物的特异性,结果仅有淡紫拟青霉菌株可扩增到相应的SCAR条带,表明该引物可用于土壤中淡紫拟青霉的快速鉴别。2、建立了淡紫拟青霉荧光定量检测体系。利用淡紫拟青霉YES-2-14菌株的RAPD克隆质粒为标准物质,建立标准曲线,相关系数为0.995。经过土壤样品试验,得出相对标准曲线相关系数为0.9977,表明所建立的淡紫拟青霉荧光定量检测体系可用于土壤中淡紫拟青霉的准确定量。3、建立了尖孢镰刀菌荧光定量检测体系。利用尖孢镰刀菌T7-1-3的阳性克隆质粒为标准物质,建立了标准曲线,相关系数为0.995。经过土壤样品试验,得出相对标准曲线相关系数为0.9873。4、建立了秸秆反应堆,研究了秸秆反应堆对淡紫拟青霉与根结线虫、尖孢镰刀菌互作关系的影响。复合病圃和线虫病圃中,秸秆反应堆处理的根围土中淡紫拟青霉菌量与只加生防菌的处理中淡紫拟青霉菌量有显著性差异(p=0.05),根结线虫的数量比只加生防菌的处理中少,这说明秸秆反应堆能促进淡紫拟青霉的增殖,同时增强了淡紫拟青霉对根结线虫的抑制作用；秸秆反应堆处理后,复合病圃根围土中尖孢镰刀菌菌量与只加生防菌的处理中尖孢镰刀菌菌量差异不显著(p=0.05),说明秸秆反应堆处理后,淡紫拟青霉对尖孢镰刀菌的抑制作用没有增强。