黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的富集、分离纯化及抗氧化活性研究

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黄芪作为一种传统的中药材,具有广泛的药理学活性。本文以富集和分离纯化黄芪废渣中的毛蕊异黄酮和芒柄花素为目标,建立了黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的分析检测方法,通过大孔吸附树脂富集、柱色谱分离、低温析晶和重结晶等技术手段对毛蕊异黄酮和芒柄花素进行了富集和分离纯化,同时进行了抗氧化活性测试,为合理高效利用黄芪资源及中药产业的现代化提供了必要的科学依据。1.建立了HPLC检测方法测定黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的条件:色谱柱:Phenomenex Gemini C18110A (250mm×4.6mm I.D.,5μm);流动相:甲醇—水—甲酸(60:39.95:0.05,v/v/v);流速:1mL/min;进样量:10μL;柱温:25℃;检测波长:毛蕊异黄酮219nm,芒柄花素248nm。通过方法学考察,检测方法中各项指标符合分析要求。2.利用大孔吸附树脂富集分离黄芪废渣中的毛蕊异黄酮和芒柄花素,确定了HPD500型大孔吸附树脂对毛蕊异黄酮和芒柄花素的分离条件:树脂类型:HPD500型上样浓度:毛蕊异黄酮为0.69mg/mL,芒柄花素为0.31mg/mL样品溶液pH值:4上样体积:12BV(108mL)上样流速:0.1mL/min解吸溶液:60%乙醇溶液解吸溶液体积:15BV(135mL)在上述优化的条件下,经过HPD500型大孔吸附树脂处理,毛蕊异黄酮的含量从1.75%增加到6.49%,提高了4.41倍;芒柄花素的含量从0.73%增加到2.78%,提高了4.60倍,回收率分别为75.16%和77.06%。3.通过硅胶柱层析、低温析晶和重结晶等技术对经大孔吸附树脂处理后样品中的毛蕊异黄酮和芒柄花素进行了进一步分离纯化,最终得到了毛蕊异黄酮和芒柄花素晶体,毛蕊异黄酮总收率为37.80%,纯度为95%;芒柄花素总收率为32.37%,纯度为94%。4.通过DPPH清除试验对黄芪残渣提取物及其各组分进行了抗氧化活性的研究,结果证明黄芪异黄酮具有良好的DPPH自由基清除能力。毛蕊异黄酮、60%乙醇洗脱物和粗提物清除自由基的IC50值分别为0.02、0.03和0.05mg/mL,结果表明毛蕊异黄酮具有良好的DPPH自由基清除能力。本文建立了黄芪废渣中毛蕊异黄酮和芒柄花素的分析检测方法并进行了富集、分离纯化研究,获得到了高纯度毛蕊异黄酮和芒柄花素单体,抗氧化活性表明毛蕊异黄酮具有良好的DPPH自由基清除能力。本研究为黄芪资源的合理开发利用、大规模工业生产及作为天然抗氧化剂提供了坚实的研究基础。
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