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本论文运用生物信息学和分子生物学技术,在对家蝇幼虫Defensin基因进行克隆分析的基础上,采用原核和真核表达系统对目的基因进行表达,表达产物经亲和层析分离纯化后,以大肠杆菌为受试对象,对目的蛋白的抑菌活性进行初步研究。
研究用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌免疫家蝇三龄幼虫,48h后采用TRIzol试剂提取总RNA。根据GenBank上公布的家蝇成虫防御素基因,利用PrimerPremier5.0生物学软件设计一对特异性引物进行RT-PCR。采用克隆技术,构建Defensin基因的原核表达载体。
本实验利用RT-PCR技术,成功克隆了家蝇幼虫Defensin基因。