第一部分P2Y6受体在人胃癌组织及胃癌细胞系中的表达目的:观察P2Y6受体在人胃癌与癌旁正常组织以及胃癌细胞系与正常胃黏膜细胞中的表达变化。方法:采用免疫组化技术检测P2Y6受体在胃癌组织及癌旁正常组织的蛋白表达情况,并与临床病理特征以及病人的生存预后进行相关性分析;qRT-PCR检测P2Y6受体在胃癌组织与癌旁正常组织以及癌细胞系与正常胃黏膜细胞GES-1 m RNA水平的表达;Western blot检测P2Y6受体在胃癌细胞系与正常胃黏膜细胞GES-1蛋白水平的表达。结果:免疫组化实验发现P2Y6受体蛋白在胃癌组织的表达低于癌旁正常组织,而且发现P2Y6受体在胃癌组织标本里面的蛋白表达值高的,肿瘤小、分化好、淋巴结转移少以及生存时间长;qRT-PCR结果显示P2Y6受体mRNA在胃癌组织的表达低于癌旁正常组织,在胃癌细胞系的表达低于正常胃黏膜细胞GES-1的表达;Western blot结果表明P2Y6受体蛋白在胃癌细胞系的表达低于正常胃黏膜细胞GES-1的表达。结论:P2Y6受体在人胃癌组织以及胃癌细胞系中低表达,提示其在胃癌过程中可能起到抑癌基因的作用。第二部分UTP对胃癌细胞行为学的影响目的:研究UTP对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭以及其体内、外生长的影响。方法:CCK8实验检测UTP、UDP、Spiperone、CPA、MRS2578、shP2Y6、BAPTA-AM和2-APB对胃癌细胞MKN-45和SGC-7901增殖的影响;流式细胞技术检测UTP、UDP、Spiperone和CPA对胃癌细胞SGC-7901周期的影响;Western blot检测UTP、UDP、Spiperone和CPA对胃癌细胞Rb的磷酸化和Cyclin D1的影响;细胞划痕实验检测UTP对胃癌细胞MKN-45和SGC-7901迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测UTP对MKN-45和SGC-7901及GES-1细胞侵袭能力的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测UTP对胃癌的体内生长的影响。结果:CCK8实验结果显示UTP、UDP、Spiperone和CPA抑制胃癌细胞MKN-45和SGC-7901的增殖,MRS2578、shP2Y6、BAPTA-AM和2-APB能恢复UTP对胃癌细胞增殖的抑制;流式细胞技术结果表明UTP、UDP、Spiperone和CPA阻滞胃癌细胞SGC-7901细胞周期在G1期;Western blot显示UTP、UDP、Spiperone和CPA抑制胃癌细胞Rb的磷酸化和Cyclin D1的表达;细胞划痕实验显示UTP抑制胃癌细胞MKN-45和SGC-7901的迁移能力;Transwell侵袭实验证实UTP抑制MKN-45和SGC-7901细胞的侵袭能力,但不影响正常胃黏膜细胞GES-1;裸鼠皮下成瘤实验结果显示UTP抑制胃癌的体内生长,而且可被P2Y6受体拮抗剂以及干扰P2Y6受体所逆转。结论:UTP通过P2Y6受体抑制胃癌的体内、外生长,和抑制胃癌细胞的迁移和侵袭。第三部分UTP抑制胃癌细胞的分子机制研究第一节目的:研究UTP抑制胃癌细胞增殖的分子机制。方法:单细胞Ca²⁺成像技术检测UTP、UDP、MRS2578对胃癌细胞MKN-45和SGC-7901细胞内Ca²⁺的影响;0Ca²⁺和2mM Ca²⁺的时候,UTP、UTP+U73122、UTP+2-APB,对胃癌细胞内Ca²⁺水平的影响;0Ca²⁺的时候,UTP、CPA、Spiperone对胃癌细胞内Ca²⁺水平的影响;0Ca²⁺的时候,CPA或者Spiperone刺激之后再用UTP刺激对胃癌细胞内Ca²⁺水平的影响。Western blot检测UTP、UDP、Spiperone、UTP+MRS2578以及UTP+2-APB对β-catenin（Ser675）的影响。结果:UTP、UDP增加胃癌细胞MKN-45和SGC-7901内Ca²⁺水平,MRS2578抑制这一作用;0Ca²⁺和2mM Ca²⁺的时候,UTP都增加细胞内Ca²⁺,U73122和2-APB都可以抑制这一作用;0Ca²⁺的时候,UTP、CPA、Spiperone增加细胞内Ca²⁺;0Ca²⁺的时候,CPA或者Spiperone刺激增加细胞内Ca²⁺,再用UTP刺激检测不到Ca²⁺变化的信号。UTP、UDP、Spiperone抑制β-catenin（Ser675）的表达,而MRS2578和2-APB可以逆转这一作用。结论:1、UTP通过P2Y6受体引起细胞内Ca²⁺增加,UTP引起的细胞内Ca²⁺增加是由于内Ca²⁺的释放及继发外Ca²⁺的内流。2、UTP通过P2Y6受体引起内Ca²⁺增加,抑制β-catenin（Ser675）磷酸化的表达。第二节目的:研究UTP抑制胃癌细胞迁移和侵袭的分子机制。方法:Western blot检测PTEN在GES-1和MKN-45以及SGC-7901细胞中的表达情况,以及UTP对胃癌细胞PTEN磷酸化水平、Vimentin蛋白表达水平的影响。结果:PTEN基因在胃癌细胞MKN-45和SGC-7901的表达低于正常胃黏膜细胞GES-1。UTP上调了胃癌细胞内PTEN磷酸化水平,抑制了Vimentin蛋白的表达。结论:UTP通过PTEN/Vimentin抑制了胃癌细胞的迁移和侵袭。