【摘 要】
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目的:探讨低剂量A型肉毒毒素对神经干细胞增殖的影响及作用机制。方法:从Sprague-Dawley大鼠胎鼠(E15)大脑室管膜下区分离提纯神经干细胞(NSCs),利用免疫荧光检测NSCs纯度,然
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目的:探讨低剂量A型肉毒毒素对神经干细胞增殖的影响及作用机制。方法:从Sprague-Dawley大鼠胎鼠(E15)大脑室管膜下区分离提纯神经干细胞(NSCs),利用免疫荧光检测NSCs纯度,然后分别加入浓度为0.001、0.01、0.1、1和10U/ml的A型肉毒毒素(BoNT/A)和等量生理盐水(Control,对照组),共六组。运用CCK-8法分别测量24h、48 h和72h后各组的吸光度,以得到促进NSCs增殖的最适BoNT/A浓度;运用上述方法再次分离提纯获得NSCs,加入已经通过上述实验得到的最适BoNT/A浓度作为实验组,加入等量生理盐水作为对照组(Control),采用Western blotting检测增殖相关蛋白(cyclin D1、PCNA)和Wnt通路相关蛋白(Rac1、β-catenin)的表达;在细胞培养过程中加入适当量Rac1抑制剂(NSC23766),利用Western blotting分别检测增殖相关蛋白(cyclin D1、PCNA)和Wnt通路相关蛋白(Rac1、β-catenin)的表达变化,以进一步确定Rac1在NSCs增殖过程中所发挥的作用及其与β-catenin蛋白的上下游关系。结果:0.01U/ml BoNT/A可以显著促进NSCs增殖(P<0.05);采用Western blotting可以发现,0.01U/mlBoNT/A可以显著促进cyclin D1、PCNA、Rac1和β-catenin表达增高(P<0.05);加入Rac1抑制剂(NSC23766)后,cyclin D1、PCNA、Rac1和β-catenin的表达均不同程度地下降,说明Rac1在这一细胞活动中处于上述四种蛋白的上游。结论:低剂量BoNT/A可以显著促进NSCs增殖;在BoNT/A促进NSCs增殖的这一细胞活动中,Wnt通路中的Rac1/β-catenin这一分支发挥了重要作用。
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