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目的:观察黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides,APS)体外干预大鼠骨髓源性内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)局部移植对糖尿病周围神经病变(Diabetic Peripheral Neuropathy,DPN)模型大鼠的影响:1.对DPN大鼠坐骨神经区血液流速的影响。2.对DPN大鼠坐骨神经血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、神经生长因子(NerveGrowthFactor,NGF)表达的影响。方法:1.应用密度梯度离心法提取大鼠骨髓单个核细胞,用含有20%胎牛血清的DMEM低糖培养基体外培养7天;使用双荧光染色法及流式细胞术进行细胞抽样鉴定。将EPCs用含有0.4mg/mL APS的低糖培养基体外干预培养24小时,收集细胞备用。2.使用高糖高脂饲料喂养、1%链脲佐菌素(STZ)溶液一次性腹腔注射建立DPN大鼠模型,造模前后使用无创肌电图仪测量所有大鼠坐骨神经的运动神经传导速度(Motor Nerve Conduction Velocity,MNCV)变化。将所有大鼠分为以下五组:正常组(正常大鼠10只)、DPN组(10只)、PBS组(10只)、EPCs组(10只)、APS干预组(10只)。3.实验大鼠在麻醉状态下沿坐骨神经走形的肌肉附近进行局部移植治疗:APS干预组予黄芪多糖干预24小时后的内皮祖细胞移植,EPCs组用体外培养的内皮祖细胞局部移植治疗,PBS组用磷酸缓冲盐溶液进行局部移植,DPN组及正常组不予任何处理。移植治疗前后测定各组大鼠坐骨神经区血液流速变化,并采用Western blot及Real-Time PCR技术检测所有大鼠坐骨神经VEGF、NGF的表达。结果:(1)坐骨神经区血液流速变化情况:正常大鼠坐骨神经区血流速度为100.06±7.57cm/s,造模成功后DPN模型大鼠其血液流速明显减慢至40.25±3.00cm/s,造模前后差异显著,统计学有意义(P<0.05)。与DPN组相比,PBS移植治疗并不能改善DPN模型大鼠坐骨神经区血液流速,而APS干预EPCs移植治疗及单纯EPCs移植治疗能在一定程度上增加其血流速度,且差异显著,统计学有意义(P<0.05)。APS干预EPCs移植治疗后,DPN大鼠坐骨神经区血液流速增加至76.46±3.20cm/s,与单纯EPCs移植组相比,血流速度改善更明显,差异显著(P<0.05)。(2)各组大鼠模型坐骨神经中VEGF蛋白及VEGFmRNA表达情况:正常大鼠坐骨神经中VEGF蛋白及VEGFmRNA呈低表达,DPN大鼠造模成功后其表达量明显增加,两组相比有差异性(P<0.05)。PBS移植治疗后,其坐骨神经内VEGF蛋白及VEGFmRNA表达未见改善;而APS干预EPCs移植治疗及单纯EPCs移植治疗能在一定程度上下调其坐骨神经内VEGF蛋白及VEGFmRNA表达量,和DPN组大鼠相比,差异显著,统计学有意义(P<0.05)。与单纯EPCs移植组相比,APS干预EPCs移植治疗更能明显下调其坐骨神经内VEGF蛋白及VEGFmRNA表达量,差异显著(P<0.05)。(3)移植治疗后各组模型大鼠坐骨神经中NGF蛋白及NGFmRNA表达情况:与正常组大鼠相比,DPN模型大鼠坐骨神经中NGF蛋白及NGFmRNA表达量明显下降,差异显著,统计学有意义(P<0.05)。单纯的EPCs及APS干预后的EPCs移植治疗可使其大鼠坐骨神经内的NGF蛋白及NGFmRNA表达较DPN组大鼠上升,差异有统计学意义(P<0.05);PBS移植不能增加其表达,和DPN组大鼠相比,无差异(P>0.05)。与EPCs移植组大鼠相比,APS干预后的EPCs移植治疗更能明显增加其大鼠坐骨神经内的NGF蛋白及NGFmRNA表达量,差异显著,统计学有意义(P<0.05)。结论:(1)EPCs移植治疗能改善DPN模型大鼠坐骨神经区血流速度,同时可以增加其坐骨神经内NGF蛋白及NGFmRNA表达量,下调其VEGF蛋白及VEGFmRNA表达量。(2)APS干预能明显增加EPCs移植疗效:APS体外干预EPCs移植治疗后,DPN模型大鼠的坐骨神经区血液流速得到明显改善,其坐骨神经中NGF蛋白、NGFmRNA的表达量明显上升,VEGF蛋白及VEGFmRNA表达量明显下降。