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目的:通过比较再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者和骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞含量和比值、T-be(tT box expressed in T cells,T-bet)基因的表达及血清中干扰素γ(IFN-γ)水平差异,探讨上述指标对二者发病机制、鉴别诊断及临床治疗的指导意义。方法:1研究对象:14例AA患者及20例MDS患者及30名健康者作为正常对照(normal control NC)组。其中AA患者14例,男8例、女6例,年龄范围14~66岁,中位年龄26岁,其中慢性再生障碍性贫血(CAA)9例、重型再生障碍性贫血(SAA)5例。MDS患者20例,男9例、女11例,年龄范围27~75岁,中位年龄58岁,按FAB分型,其中难治性贫血(RA)8例、原始细胞过多难治性贫血(RAEB) 12例。正常对照30例,均取自常规体检正常的人群,男女各15例,年龄范围20-75岁,中位年龄55岁。2研究方法:分离AA、MDS患者及正常对照组周血单个核细胞,采用免疫荧光标记和三色流式细胞术检测周血CD3+,CD4+,CD8+ T细胞占T细胞比例;提取周血单个核细胞RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测T-bet基因的表达量,用ELISA法测定患者血清IFN-γ的表达。并对14例AA患者追踪随访6个月,进行治疗前后的对比(均予以环孢素A5mg/kg.d为主的治疗),收集患者基本临床资料进行分析。结果:1 T淋巴细胞免疫表型CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+表达1.1 AA组CD3十T细胞百分率高于正常对照组(75.338±5.620 VS67.441±12.817,P<0.05);CD4+T细胞低于正常对照组,但相比无统计学差异(31.852±6.425VS33.424±8.415, P>0.05);CD8+T细胞明显高与正常对照组(34.956±6.206 VS27.032±9.046P<0.05); CD4+/CD8+相比对照组显著下降(1.177±0.436 VS1.484±0.378 P<0.05)。1.2 MDS组CD3十T细胞百分率低于正常对照组(62.241±9.102 VS67.441±12.817, P<0.05);低危组CD3十T细胞百分率低于正常对照组,但没有统计学意义(65.803±13.859 VS67.441±12.817, P>0.05);高危组CD3十T细胞百分率低于正常对照组(52.417±12.585 VS67.441±12.817 P<0.05)。MDS组,高危组CD4十T细胞百分率均高于正常对照组(39.283±9.913 VS33.424±8.415 P<0.05, 42.536±10.711 VS33.424±8.415 P<0.05);低危组CD4+T细胞的百分率与正常对照组相比无统计学意义(33.322±9.603 VS33.424±8.415 P>0.05);MDS患者、低危组的CD8十T细胞百分率高于正常对照组,但无统计学意义( 31.213±12.342 VS27.032±9.046,32.101±13.004 VS27.032±9.046 P>0.05);高危组CD8十T细胞百分率低于正常对照组,也没有统计学意义(26.634±3.568 VS 27.032±9.046 P>0.05)。MDS组,高危组CD4+/CD8+高于正常对照组( 1.630±1.063 VS1.484±0.378 P<0.05 , 1.801±1.089 VS1.484±0.378 P<0.05 );低危组的CD4+/CD8+相比正常组没有明显差异(1.3313±0.424VS1.484±0.378 P>0.05)。1.3 AA与MDS相比:AA组的CD3+T百分率(75.338±5.620)均高于MDS组( 62.241±9.102 )、低危组( 65.803±13.859 )及高危组(52.417±12.585),均有统计学意义(P<0.05)。AA组的CD4+T细胞百分率(31.852±6.425)均明显低于MDS组(39.283±9.913)及高危组(42.536±10.711),均有统计学意义(P<0.05)。AA组与低危组的CD4+T细胞百分率相比无明显差异(31.852±6.425 VS33.322±9.603 P>0.05)。AA组CD8+T细胞的百分率(34.956±6.206)均高于MDS组(31.213±2.342)、低危组(32.101±13.004)、高危组(26.634±3.568),但与低危组比较无明显差异。AA组的CD4+ /CD8+比值(1.177±0.436)均低于MDS组(1.630±1.063)、低危组(1.3313±0.424)、高危组(1.801±0.893),但与低危组比较无明显差异。1.4 AA治疗前后的比较,治疗后的AA相比治疗前,CD3+T细胞百分率(68.187±17.647)下降,CD4+T细胞百分率(33.453±8.362)升高,CD8+T细胞百分率(29.370±8.223)下降,CD4+/CD8+比值(1.221±0.425)升高,接近正常。且CD3+T细胞, CD8+T细胞,CD4+ /CD8+比值的变化均有统计学意义(P<0.05)。2 T-bet基因的表达量的比较2.1 AA组和正常对照组相比T-bet基因的表达量是增高的,有统计学意义(0.255±0.188 VS0.092±0.058,P<0.05)。2.2 MDS组正常对照组相比T-bet基因的表达量是减低的(0.085±0.041 VS0.092±0.058,P<0.05);高危组T-bet基因的表达量低于正常对照(0.061±0.018 VS0.092±0.058,P<0.05),低危组T-bet基因的表达量也低于正常对照组,但与正常对照组之间的差异没有统计学意义(0.120±0.039 VS0.092±0.058,P>0.05)。2.3 AA组T-bet基因的表达量(0.255±0.188)均高于MDS组(0.085±0.041),低危组(0.120±0.039)及高危组(0.061±0.018),均有统计学意义(P<0.05)。2.4 AA组治疗后T-bet基因的表达量相比治疗前明显下降有统计学意义(0.153±0.0 78 VS0.255±0.188 P<0.05)。3血清IFN-γ的水平在各组中的比较3.1 AA组血清IFN - r含量明显高于正常对照组,两组之间比较差异有统计学意义(9.756±2.537 VS 7.552±0.640 P<0.05)。3.2 MDS组血清中IFN-r含量明显低于正常对照组,差异有统计学意义(5.365±2.338 VS 7.552±0.640 P<0.05)。低危组血清中IFN-r含量(7.845±1.094)明显高于高危组(3.709±1.102),但与正常对照组没有统计学上的差异(7.845±1.094 VS 7.552±0.640 p>0.05)。3.3 AA组血清IFN - r含量(9.756±2.537)明显高于MDS组(5.365±2.338),低危组(7.845±1.094)及高危组(3.709±1.102),与各组间差异均有统计学意义(P<0.05)3.4 AA组治疗后的血清IFN - r含量相比治疗前明显下降有统计学意义(7.6822±2.338 VS9.756±2.537 P<0.05)。4 AA组和MDS组的T-bet基因的表达量和血清IFN - r含量的相关系数r值分别是0.64,0.70,均有统计学意义(P<0.05)。结论:1 T淋巴细胞的免疫表型CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+ AA组较MDS组CD3+T细胞、CD8+T细胞百分率明显增高,CD4+T细胞百分率下降,CD4+/CD8+比值倒置,且AA组治疗前后相比,T淋巴亚群紊乱得到纠正。说明T淋巴细胞免疫功能异常均参与了二者的发病。提示AA患者存在明显的免疫功能亢进,可能与AA的发生、发展有密切的关系,也提示免疫异常是MDS疾病的发生、发展的一个促发因素。流式细胞术检测AA和MDS的T淋巴细胞免疫表型有助于我们明确机体的免疫状态,能更好的帮助我们鉴别两者,指导我们针对两者的免疫状态合理用药。2 T-bet基因和IFN– r的表达T-bet基因在AA中的表达量高于正常对照组,MDS中T-bet基因的表达量低于对照组,且AA9.756±2.537较MDS中表达量明显增高,差异有统计学意义。AA患者血清IFN - r含量明显高于对照组,MDS患者则低于正常对照组。且各组的T-bet基因和血清IFN - r含量有明显的相关性。AA组治疗前后T-bet基因和血清IFN - r含量均明显下降。提示AA中存在Th1型细胞反应的亢进,而MDS中存在Th1型抗肿瘤作用的减弱,使得异常造血克隆得以逃脱免疫监视,逐步进展为急性白血病。3提示T-bet等多指标检测,有助于鉴别AA和MDS,并可指导治疗评价疗效。