苏云金芽胞杆菌(Bacillus thurigiensis,Bt)属革兰氏阳性菌,因其特异性的杀虫活性,成为目前应用最为广泛的微生物杀虫剂。鳞翅目昆虫是Bt的重要靶标之一,其中肠的碱性环境是Bt发挥其杀虫活性的必要条件,因此探索Bt在碱性条件下的适应机制具有重要意义。本研究分析了L-乳酸代谢在Bt碱适应性中的作用,以及转录因子Crp对L-乳酸代谢的调控作用。前期研究发现,在碱刺激条件下,芽胞杆菌的生长先出现停滞现象,经过一段时间适应后恢复生长。本研究发现,在加入不同浓度NaOH时,Bt HD73菌株的恢复生长pH保持在8.9-9.1范围内,且随着加碱浓度的增加,所需恢复生长时间越长,说明碱适应性对Bt HD73菌株的恢复生长十分重要。前期研究表明,碱刺激诱导ldh2和crp基因的转录活性显著上调。利用前期构建的ldh2和crp基因的启动子与lac Z融合质粒,通过β-半乳糖苷酶活性测定证实了上述结果。5`-RACE实验表明ldh2基因的转录起始位点位于其起始密码子上游的第11个碱基“G”。生物信息学分析发现ldh2基因的启动子区域含有与转录因子Crp识别的保守结合位点。β-半乳糖苷酶活性的检测发现,与野生型HD73相比,在crp基因缺突变株HD(△crp)中ldh2基因的转录活性显著下调。本研究成功表达和纯化了Crp蛋白,通过凝胶阻滞实验发现Crp可以与ldh2基因启动子区域直接结合,说明转录因子Crp正调控ldh2基因的转录。通过培养基中乳酸含量的测定,发现在碱性条件下HD(△ldh2)及HD(△crp)菌株产生的乳酸明显低于野生型菌株;HD(△ldh2)及HD(△crp)菌株加碱后恢复生长变慢,说明乳酸代谢参与了苏云金芽胞杆菌的碱适应过程;通过生物活性检测对比了野生型菌株与突变体菌株对昆虫的杀虫活性,发现野生型菌株晶胞混合物的杀虫活性显著高于突变体。以上结果均说明碱适应性对于苏云金芽胞杆菌侵染昆虫十分重要。