牛传染性鼻气管炎是由牛传染性鼻气管炎病毒（bovine infectious rhinotracheitis virus, IBRV）引起的一种急性、热性、接触性传染病，对世界养牛业带来巨大的经济损失。目前防制该病的主要措施是接种疫苗预防，根治的方法是检出阳性牛进行捕杀。因此，建立灵敏、快速的诊断方法就十分重要。丈献报道IBRV只有一个血清型，其gB基因是最保守序列。此外，gE基因缺失疫苗已广泛应用，建立能够区分疫苗株和野毒株的检测方法也非常必要。本研究的目的是利用套式PCR和荧光PCR技术来检测IBRV和区分野毒株和gE基因缺失疫苗株。 1．牛传染性鼻气管炎病毒套式PCR检测方法的建立 根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）的gB和gE基因序列，应用primer5.0软件设计了gB／BN和gE/EN两套套式PCR引物，分别对IBRV标准株进行PCR扩增，发现这两套引物均能扩增出与设计目的片段大小一致的特异性条带。同时对几种同属的伪狂犬病毒、马立克氏病毒、鸭瘟病毒进行扩增，发现这两套引物具有良好的特异性。经检测，引物gB／BN和gE／EN的分别能检测到0.01TCID₅₀和0.1TCID₅₀的病毒。 2．牛传染性鼻气管炎病毒荧光PCR检测方法的建立 根据牛传染性鼻气管炎病毒保守基因gB和gE基因分别设计两对引物及其相应的Taqman探针，建立、优化反应体系后，利用10倍稀释法检验方法的灵敏度，建立相对定量标准曲线：并进行了特异性检验。两组荧光PCR的灵敏度均为0.02TCID₅₀，标准曲线相关系数同为0.99。说明此方法具有很好的灵敏性和特异性。 3．牛传染性鼻气管炎病毒PCR检测方法的初步应用 用建立的牛传染性鼻气管炎病毒PCR检测方法对牛传染性鼻气管炎中和抗体阳性的鼻腔棉拭子192份进行初步应用，同时进行病毒分离。结果显示，gB套式PCR检测