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研究目的本研究通过检测Wnt信号三条通路中B-catenin.RhoA.wnt5a基因在慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmo-nary di sease,COPD)大鼠小气道成纤维细胞中的表达,以及其对COPD气道重建中主要细胞因子,转移生长因子-β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)、基质金属蛋白酶(MMP-9)的调控,从而探索Wnt信号通路干预气道重建的机制。并用苗药紫金牛、铁扫帚治疗COPD大鼠,检测COPD苗药治疗组气道成纤维细胞β-catenin、Wnt5a、RhoA基因的蛋白表达量,探讨苗药紫金牛、铁扫帚调控Wnt信号通路干预气道重建的机制。研究方法1.将100只健康雄性SD大鼠(100±20g),鼠龄为6周,随机分为正常对照组(20只)及COPD模型组(80只)。利用熏香烟及气管内注射脂多糖法建立COPD大鼠模型组。2.ELISA检测气道成纤维细胞上清液中TGF-β1、PDGF、MMP-9细胞因子的含量,运用组织贴壁的的方法进行气道成纤维细胞的培养。3.用Western blot方法检测β-catenin、RhoA、Wnt5a基因在正常对照组及COPD模型组大鼠中气道成纤维细胞的不同表达。并研究β-catenin、RhoA、Wnt5a基因表达与TGF-β1、PDGF、MMP-9细胞因子的相关性。4.苗药紫金牛、铁扫帚对Wnt信号通路的干预：将苗药紫金牛、铁扫帚各250g煎汤治疗COPD大鼠,检测COPD大鼠苗药治疗后气道成纤维细胞β-catenin、 Wnt5a、RhA基因的蛋白表达量。统计学处理采用SPSS18.0进行整理分析。计量资料以均数±标准差(x±s)形式表示,两组间比较采用独立样本t检验,三组间比较采用单因素方差分析,三组间后续两两比较采用SNK-Q检验,相关性分析采用Pearson积差相关。结果1.大鼠气道成纤维细胞上清液中TGF-p1、PDGF、MMP-9的蛋白含量在COPD大鼠中增强。2.Wnt信号三条通路中,β-catenin、RhoA、Wnt5a基因在COPD大鼠中表达增高。3.Wnt信号的三条不同途径与气道成纤维细胞上清液中TGF-β1、PDGF、MMP-9细胞因子的相关分析,呈正相关。4.苗药治疗中,Wnt信号通路β-catenin、RhoA基因在苗药组中低表达,Wnt5a基因高表达。结论1.Wnt信号通路干预COPD大鼠气道重建机制中,通过研究发现,COPD大鼠气道成纤维细胞上清液中TGF-β1、PDGF、MMP-9这三个细胞因子是COPD大鼠气道重建中成纤维细胞增殖的关键因子。而Wnt信号通路对组织纤维化有关,且能调控TGF-β1、PDGF、MMP-9细胞因子。因此,Wnt信号通路在COPD大鼠气道重建中有调控作用。2.苗药紫金牛、铁扫帚对Wnt信号通路干预,研究表明,苗药抑制Wnt信号通路中β-catenin.RhoA基因。