【摘 要】
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目的用TdR(胸腺嘧啶核苷)调控人肝癌细胞株HepG2的细胞周期,运用双向电泳-图像分析-质谱技术研究肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期全细胞蛋白质组表达的差异,探索参与肝癌细胞
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目的用TdR(胸腺嘧啶核苷)调控人肝癌细胞株HepG2的细胞周期,运用双向电泳-图像分析-质谱技术研究肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期全细胞蛋白质组表达的差异,探索参与肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期调控相关的蛋白质。方法1. TdR阻断肝癌细胞株HepG2于G1期末,去除TdR,培养不同时间,分别得到同步化的G1期、G2/M期细胞,采用流式细胞术检测。2.裂解同步化的G1期、G2/M期细胞,提取蛋白。3.采用比较蛋白质组学的研究技术(双向电泳、质谱分析)筛选G1期、G2/M期差异表达的蛋白质。结果流式细胞术检测显示TdR诱导后,分别获得(63.62±2.82)%的G2/M期同步化细胞,(75.24±0.17)%的G1期同步化细胞,通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到21个差异表达的蛋白。其中G2/M期表达,G1期未见表达的蛋白有10种;存在三倍以上表达差异的蛋白有11种。结论TdR阻断法能够获得很好的同步化细胞。肝癌细胞的G1期和G2/M期蛋白质表达谱存在差异,这些差异表达的蛋白质涉及到参与细胞周期调控、DNA结合、转录调控、mRNA剪接、肽链合成起始、折叠以及细胞代谢等方面。
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