【摘 要】
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糖皮质激素被认为是多种器官系统成熟过程中重要的调节因素,在大鼠出生后前两周内给予外源性糖皮质激素能够引起胃肠道的早熟,但其具体机制仍然不清楚。研究证明,促早熟作用并不是糖皮质激素的直接作用效应,而是糖皮质激素与其它的组织、细胞尤其是间充质细胞共同作用的结果。甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP）是胃肠道发育过程中一种重要的生长因子,有文献报道,消化道内的AFP主要存在于间充质细胞
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糖皮质激素被认为是多种器官系统成熟过程中重要的调节因素,在大鼠出生后前两周内给予外源性糖皮质激素能够引起胃肠道的早熟,但其具体机制仍然不清楚。研究证明,促早熟作用并不是糖皮质激素的直接作用效应,而是糖皮质激素与其它的组织、细胞尤其是间充质细胞共同作用的结果。甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP）是胃肠道发育过程中一种重要的生长因子,有文献报道,消化道内的AFP主要存在于间充质细胞中。因此我们推测,消化道内的AFP有可能参与了糖皮质激素的促早熟作用。我们将实验分为两部分:1.明确AFP在不同发育阶段的大鼠结肠内的表达和定位;2.研究AFP的表达是否与外源性糖皮质激素诱导的结肠提前发育过程有所联系。第一部分:取大鼠胚胎第18.5天（embryonic day 18.5, e18.5）、e20.5、出生当天（postnatal day 0, p0）、p7、p14、p21和成年（8w）的结肠组织,用RT-PCR和免疫印迹法检测AFP的表达水平,用免疫荧光双染技术鉴定AFP的细胞学定位。结果发现,免疫印迹法只检测到72kDa亚型的AFP表达;AFP mRNA及蛋白的表达水平在大鼠胚胎第18.5天最高,之后逐渐下降,而在成年大鼠未检测到;在检测的各时期,AFP均与波形蛋白（vimentin）在间充质细胞共表达。第二部分:我们选择在大鼠出生后的第7天、9天和11天皮下注射药物,实验分组如下:1)等体积的生理盐水对照组;2)100μg/g的氢化可的松（hydrocortisone,HC）处理组;3)100μg/g HC和100μg/g米非司酮（特异性糖皮质激素胞浆受体拮抗剂）共同处理组;4)100μg/g的米非司酮处理组。然后于出生后的第8天、10天和14天时提取结肠组织。采用苏木素-伊红染色法观察结肠的形态学变化,肌张力测定法检测结肠的动力学变化;AFP的表达由RT-PCR和免疫印迹技术检测;免疫荧光双染技术用来鉴定AFP的细胞学定位。结果发现,外源性HC能促进哺乳期大鼠结肠的形态和功能提前发育,并伴有AFP mRNA和蛋白的表达上调和AFP阳性细胞数量增多。米非司酮能显著逆转HC所诱导的AFP的蛋白表达量上升。以上结果表明,结肠中的AFP是由间充质细胞产生的;哺乳期给予外源性的糖皮质激素可以促进大鼠结肠形态和功能的提前发育,在此过程中,AFP的表达量上升;外源性的糖皮质激素促进大鼠结肠的提前发育可能是通过AFP的表达上调实现的。
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